[发明专利]HSV1-tk/GCV诱导型血液系统缺陷小鼠模型的制备方法及应用有效
| 申请号： | 202110753676.8 | 申请日： | 2021-07-02 |
| 公开（公告）号： | CN113564203B | 公开（公告）日： | 2023-01-10 |
| 发明（设计）人： | 赵同标;曹卫云;曹佳妮;李晓燕;李兴;徐昊宇 | 申请（专利权）人： | 中国科学院动物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/90;C12N15/54;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京领科知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11690 | 代理人： | 张丹 |
| 地址： | 100101 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | hsv1 tk gcv 诱导 血液 系统 缺陷 小鼠 模型 制备 方法 应用 | ||
1.一种重组载体表达单元，其特征在于，所述重组载体表达单元由依次连接的Vav1启动子-HS2/1、自杀基因HSV1-tk、Vav1启动子-HS4以及Vav1启动子-HS5组成。
2.根据权利要求1所述的重组载体表达单元体，其特征在于，所述重组载体表达单元按照如下方法构建：扩增Vav1基因的HS2/1、HS4、HS5结构域以及自杀基因HSV1-tk，按照Vav1启动子-HS2/1、Vav1启动子-HS4以及Vav1启动子-HS5的顺序依次连接，将自杀基因HSV1-tk插入到Vav1启动子-HS2/1和Vav1启动子-HS4之间。
3.根据权利要求1或2所述的重组载体表达单元，其特征在于，所述Vav1启动子-HS2/1、自杀基因HSV1-tk、Vav1启动子-HS4以及Vav1启动子-HS5的核苷酸序列分别如SEQ IDNO.1-4所示。
4.包含权利要求1-3任其一所述重组载体表达单元的载体。
5.一种转基因动物模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：将权利要求4所述的载体整合到动物基因组。
6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法具体包括：提取和纯化权利要求4所述的载体，线性化处理，利用受精卵原核注射使目的基因整合到动物基因组，输卵管胚胎移植入代孕鼠中，21天可获得首建鼠，待仔鼠生长到两周龄时，取2毫米鼠尾，碱性裂解法提取鼠尾基因组，设计HSV1-tk特异性引物，进行基因型鉴定，出现HSV1-tk目的条带的为阳性首建鼠。
7.一种制备嵌合动物模型的方法，其特征在于，所述方法包括将权利要求6所得阳性首建鼠全骨髓移植给经过辐照处理的野生型正常小鼠的步骤。
8.根据权利要求5-7任其一制备的动物模型在异种器官移植或异种血液系统融合或受体骨髓清除或异种器官再造或免疫耐受机制研究的应用。
9.根据权利要求5-7任其一制备的动物模型作为造血和免疫系统细胞功能以及表型研究的模式动物的应用。
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