[发明专利]HSV1-tk/GCV诱导型血液系统缺陷小鼠模型的制备方法及应用

说明书

本发明提供了一种转导HSV1‑tk自杀基因在血液系统特异性高表达的小鼠模型及其制备方法和用途，本发明转基因小鼠HS21/45vav1‑HSV1‑tkB6/C57模型在同种和异种器官移植中清除受体免疫系统，避免排斥反应中应用价值巨大，已经实现了同种血液系统嵌合体的构建，最终实现异种血液系统的嵌合，为同种或异种造血干细胞向受体B6/C57小鼠移植创造条件，该发明还可以应用在难以进行辐照处理的大动物模型如猪，非人灵长类中，同时本发明在异种器官再造中的免疫耐受方面也具有深远的研究意义。

技术领域

本发明涉及小鼠模型的制备方法及其应用，具体涉及由造血系统特异基因Vav1启动子引导的自杀基因-单纯疱疹病毒1型胸苷激酶(HSV1-tk)转基因B6/C57小鼠在血液系统特异性高表达HSV1-tk，通过药物GCV诱导血液系统缺陷的动物模型及其制备方法和应用。

背景技术

血液系统嵌合体是研究同种或异种移植的供体免疫原性与免疫耐受强而可靠的方法。研究证明，通过共移植人胚胎胸腺、肝脏和CD34⁺干细胞到重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)鼠，可以在NOD/SCID鼠重建有功能的人免疫系统，获得免疫系统人源化小鼠，说明在小鼠体内重建人类免疫系统是切实可行的，当下，人源化小鼠模型已成为人类造血功能、先天性和适应性免疫、自身免疫、传染病、癌症生物学和再生医学等领域的重要模型工具。但是，现阶段的人源化小鼠是基于重症联合免疫缺陷小鼠制备出来的，在研究应用中存在一定的局限性，而且在后期应用过程中存在着饲养条件要求高，生存期短等缺点。目前为止，在正常的B6/C57小鼠体内并未实现人类免疫系统的重建。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种转导HSV1-tk自杀基因在血液系统特异性高表达的小鼠模型及其制备方法和用途，构建转基因的载体是插入由Vav1启动子驱动的HSV1-tk的表达质粒，线性化转基因载体，纯化后通过显微注射技术将带有目的基因的核酸注射入B6/C57小鼠受精卵中，使外源基因整合入小鼠基因组中，检测其对血液系统杀伤、清除的作用效率，以及对后期异种造血干细胞嵌合体形成等功能的影响。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：

一种重组载体表达单元，其特征在于，所述重组载体表达单元包括Vav1启动子，HS2/1、HS4和HS5三个结构域以及自杀基因HSV1-tk。

进一步地，所述重组载体表达单元由依次连接的Vav1启动子-HS2/1、自杀基因HSV1-tk、Vav1启动子-HS4以及Vav1启动子-HS5组成。

更进一步地，所述重组载体表达单元按照如下方法构建：扩增Vav1基因的HS2/1、HS4、HS5结构域以及自杀基因HSV1-tk，按照Vav1启动子-HS2/1、Vav1启动子-HS4以及Vav1启动子-HS5的顺序依次连接，将自杀基因HSV1-tk插入到Vav1启动子-HS2/1和Vav1启动子-HS4之间。

更优选地，所述Vav1启动子-HS2/1、自杀基因HSV1-tk、Vav1启动子-HS4以及Vav1启动子-HS5的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1-4所示。

本发明还要求保护包含上述任其一所述重组载体表达单元的载体。

作为本发明的另一技术方案，

本发明还涉及一种转基因动物模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：将权利要求5所述的载体整合到动物基因组。

具体地指，所述构建方法具体包括：提取和纯化上述的载体，行线性化处理，利用受精卵原核注射使目的基因整合到动物基因组，输卵管胚胎移植入代孕鼠中，21天可获得首建鼠，待仔鼠生长到两周龄时，剪去2毫米鼠尾，碱性裂解法提取鼠尾基因组，设计HSV1-tk特异性引物，进行基因型鉴定，出现HSV1-tk目的条带的为阳性首建鼠。

作为本发明的另一技术方案，