[发明专利]测定人血浆中依折麦布、总依折麦布、阿托伐他汀及相关代谢产物的方法

说明书

本发明取用100μL血浆样品进行简单的蛋白沉淀处理后同时测定依折麦布、阿托伐他汀、邻羟基阿托伐他汀和对羟基阿托伐他汀浓度；对于总依折麦布浓度的测定取用50μL血浆样品，用β‑葡萄糖醛酸酶酶解孵育30分钟后再采用蛋白沉淀进行前处理。该发明操作简便，前处理简单，质谱采集时间短(4.5min)，血浆用量少，各项验证指标均满足法规要求，能准确定量游离依折麦布和总依折麦布，最大限度上简化和方便实验室操作，满足临床的需求。

技术领域

本发明涉及一种人血浆中药物浓度的检测方法，具体涉及一种采用高效液相色谱串联质谱技术测定人血浆中依折麦布、总依折麦布、阿托伐他汀及相关代谢产物的方法。

背景技术

以低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)或总胆固醇(TC)升高为特点的血脂异常是动脉粥样硬化性心血管疾病重要的危险因素。有效控制血脂异常，对包括冠心病、缺血性脑卒中、间歇性跛行以及症状性颈动脉狭窄等动脉粥样硬化性心血管疾病的防控具有重要意义。

依折麦布阿托伐他汀为高脂血症治疗药物。其中，依折麦布通过抑制小肠对胆固醇吸收来减少血液中胆固醇水平，阿托伐他汀通过抑制肝脏内3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶及胆固醇的合成而降低血浆胆固醇和脂蛋白水平，并通过增加肝脏细胞表面的低密度脂蛋白(LDL)受体数以增强低密度脂蛋白的摄取和分解代谢。二者作用机制互补，可有效发挥降脂作用。

国内外文献报道中分别测定人血浆中依折麦布、总依折麦布、阿托伐他汀、邻羟基阿托伐他汀和对羟基阿托伐他汀浓度的方法主要有HPLC-UV法和LC-MS/MS法，比如文献“Concurrent determination of ezetimibe and its phase-ⅠandⅡmetabolites byHPLC with UV detection：Quantitative application to various in vitro metabolicstability studies and for qualitative estimation in bile”报道一种利用HPLC-UV同时分离和定量依折麦布、依折麦布酮和依折麦布葡萄糖苷，但是每个样本采集需要40分钟且进样量需要50μL，费时费力。文献“LC-MS/MS Simultaneous Determination ofAtorvastatin and Ezetimibe in Human Plasma”报道一种LC-MS/MS法同时测定人血浆中阿托伐他汀和依折麦布，虽然质谱采集耗时较短，但是前处理需要液液萃取等复杂程序且血浆样本量需要1mL，没有提供阿托伐他汀相关代谢物的检测方法。文献“Simultaneousdetermination of ezetimibe and its glucuronide metabolite in human plasma bysolid phase extraction and liquid chromatography-tandem mass spectrometry”报道一种LC-MS/MS法同时测定人血浆中依折麦布及其葡萄糖醛酸代谢产物，该方法采用固相萃取等复杂的前处理步骤大大增加了实验成本及时间。文献“LC-MS/MS测定人血浆中依折麦布和总依折麦布的含量及其应用”报道了一种LC-MS/MS法测定人血浆中依折麦布和总依折麦布，该法采用简单的蛋白沉淀处理血浆样品测定依折麦布含量，对于总依折麦布含量的测定采用β-葡萄糖醛酸酶酶解孵育后再进行蛋白沉淀提取血浆样品，但该法需要孵育1小时，耗时较长。目前还没有文献报道利用LC-MS/MS法分别测定人血浆中依折麦布、阿托伐他汀、邻羟基阿托伐他汀、对羟基阿托伐他汀和总依折麦布浓度的方法。

发明内容

发明目的：本发明的目的是提供一种采用高效液相色谱串联质谱技术能分别定量检测血浆中游离的依折麦布、阿托伐他汀、邻羟基阿托伐他汀、对羟基阿托伐他汀和总依折麦布的方法。该检测方法前处理简单、质谱采集时间短、血浆用量少、成本低廉、方便实验室进行大规模临床样本检测。

技术方案：