[发明专利]血小板外泌体结合干细胞外泌体的混合冻晶粉及其制作方法

说明书

本发明提供血小板外泌体结合干细胞外泌体的混合冻晶粉及其制作方法，其步骤包含：对一血小板血浆样本进行离心以取得第一血小板外泌体；对一全血样本进行离心以取得一血小板样本，接着对该血小板样本进行离心以取得一第二血小板外泌体；对一干细胞培养基样本进行离心以取得一第一干细胞外泌体；对一干细胞样本进行超音波震荡及离心以取得一第二干细胞外泌体；将上述外泌体分别冷冻干燥后，得到血小板外泌体与干细胞外泌体的混合冻晶粉。

技术领域

本发明是涉及冻晶粉技术领域，具体地涉及血小板外泌体结合干细胞外泌体的混合冻晶粉及其制作方法。

背景技术

外泌体(exosomes)是细胞吞噬异源物质后以出芽方式向内凹陷形成含有多个小泡的多泡体(multivesicular body,MVB)，再由多泡体与细胞膜融合而释放的小囊泡，其为一种直径约为30～100nm的细胞外囊性小泡。外泌体可分布于干细胞、肿瘤细胞、巨噬细胞、树突状细胞、肥大细胞、人羊膜上皮细胞、内皮祖细胞等不同类型的细胞释放，且广泛分布于各种体液中，如唾液、腹水、心包积液、尿液、羊水、乳汁、脑脊液和血液等。外泌体还携带多种分子成分参与细胞通讯、细胞迁移、血管新生和肿瘤细胞生长等生理和病理过程。外泌体的结构内包含信息核酸结构(mRNA)、微核醣核酸(microRNA)、去氧核核醣核酸(DNA)片段、蛋白质、脂质、等多种物质，其中microRNA是细胞间交流的主要调节物质，能够通过自身的降解和再表达来调节受体细胞的基因表达，在肺癌、结肠直肠癌、前列腺癌等中可作为癌症早期诊断及预后的生物标志物如今，研究已经发现外泌体在肿瘤细胞发生发展、神经细胞信号转导过程中都发挥着重要作用。

富含血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)因含有大量具有生物活性的血小板，在一定的条件下，这些血小板可以透过活化过程将储存在其中的多种细胞因子释放在周围环境中，以促进细胞增殖、分化及组织重建修复，因此，对于治疗及医美方面属一新颖且便利的技术。

自体血小板血浆技术除了可运用于骨科治疗之外，在伤口的处理上也已经大量运用在糖尿病足、褥疮等慢性伤口的照顾，同时，眼科也应用此自体血小板血浆治疗角膜溃疡或干眼症，而牙科则可应用于植牙拔牙牙根伤口的填补修复。另外，在医学美容的领域中，可应用此技术于消除皱纹及改善秃发。

干细胞内的间质干细胞(Mensenchymal stem cells,MSC)是一种来源于中胚层的细胞，具有自我更新及多向分化能力。而且MSC能从多种组织中分离得到，常见的MSC一般是从骨髓、脂肪、脐带、脐血等组织提取，因此推动了其应用。在许多动物模型中可观察到MSC的旁分泌作用，相关研究证明，MSC是通过分泌因子来发挥其治疗作用以减少细胞损伤和增强修复的，这种分泌因子是被称为外泌体的膜囊泡。在临床组织再生应用的研究中指出，所述的细胞生长因子可促进毛发生长。此外，所述的细胞生长因子对于糖尿病患者所造成的局部组织缺血以及在整形手术做为伤口和疤痕的修复拥有一定程度的帮助。MSC作为外泌体的来源具有两个显著的特征，即免疫调节特性和低生产成本。MSC来源的外泌体可调控固有免疫与适应性免疫应答，通过抑制T淋巴细胞功能，降低B细胞活化、增殖与分泌，影响巨噬细胞分化与树突状细胞成熟，抑制自然杀伤细胞的细胞毒活性来发挥其免疫调控作用，从而提高MSC外泌体衍生药物递送载体的寿命和药物的生物利用度。而且，越来越多的证据显示MSC相比其他细胞能产生大量的外泌体。

因此，高纯度的外泌体有利于进行内容物的分析和功能的研究，并且由高纯度的外泌体取得分泌因子的效率较高。然而在习知技术中，由血小板取出的外泌体所制成的混合冻晶粉所得到的外泌体纯度较低。有鉴于此，本发明提出一种结合血小板外泌体与干细胞分外泌体的客制化混合冻晶粉及其制作方法。

发明内容

本发明之一范畴在于提供了一种血小板外泌体结合干细胞外泌体的混合冻晶粉及其制备方法。根据本发明的一具体实施例，混合冻晶粉包含有血小板外泌体的粉末及干细胞外泌体的粉末。

其中，血小板外泌体是由欲使用混合冻晶粉的使用者血液中取得。