[发明专利]一种高粱种皮关键呈色物质的鉴别及分析方法

权利要求书

1.木犀草定和/或芹菜定在鉴别高粱种皮颜色中的应用。

2.一种鉴别高粱种皮呈色物质的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将高粱样品磨碎后过筛网，制备高粱粉；

S2、向步骤S1中制备的高粱粉中加入冰乙醇振荡提取；

S3、步骤S2提取结束后离心，取上清V1；

S4、将步骤S3取上清后的残渣重复步骤S2-S3 2次，取得上清V2、V3；

S5、合并上清V1、V2、V3，第一次过滤，除去乙醇，冻干，复溶，第二次过滤；

S6、将步骤S5制得的样品进行HPLC-TOF-MS分析。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中，将高粱样品磨碎后过0.5-3mm筛网；

优选地，过1mm筛网。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤S2中，高粱粉与冰乙醇的质量体积比为：(1-5)g：(20-50)ml；优选地，为1g：15ml；

优选地，所述冰乙醇为60-90％的冰乙醇；优选地，为80％的冰乙醇。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤S3中摇床振荡提取10-20min；优选地，摇床振荡提取15min；

优选地，2500-3500rpm转速下离心5-15min；

优选地，3000rpm转速下离心10min。

6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤S5中，第一次过滤用0.45μm滤膜；

优选地，在40-60℃下旋蒸除去乙醇；优选地，在45℃下旋蒸除去乙醇；

优选地，第二次过滤用0.22μm滤膜。

7.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤S6中，液相条件为：色谱柱：ZORBAXC18 RP-HPLC column(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：0.1％甲酸(溶于超纯水)(A液)，乙腈(B液)；流速：0.5mL/min；进样量：10μL；柱温：25℃；洗脱梯度：5％-15％B(5min)，15％～50％B(40min)，50％～70％B(2min)，70％～100％B(1min)，100％B(7min)，100％～5％B(1min)，5％B(9min)；

优选地，检测器为DAD检测器。

8.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤S6中，质谱采用Triple-TOF 5600+飞行时间液质联用仪，负离子扫描模式；扫描范围：m/z 100-1500；雾化气(GS1)：50psi；干燥气(GS2)：50psi；气帘气(CUR)：35psi；离子源温度(TEM)：550℃；离子源电压(IS)：-4500V；一级扫描：去簇电压(DP)：80V；聚焦电压(CE)：10V；二级扫描：使用TOF MS～ProductIon～IDA模式采集质谱数据，CID能量为-20、-40和-60V，进样前，用CDS泵做质量轴校正。

9.如权利要求2-8任一所述的方法，其特征在于，所述呈色物质的保留时间为18.23min和/或20.84min；

优选地，所述呈色物质为木犀草定和/或芹菜定。

10.如权利要求1所述的应用或9所述的方法，其特征在于，所述木犀草定如式I所示：

优选地，所述芹菜定如式II所示：