[发明专利]一种高粱种皮关键呈色物质的鉴别及分析方法

说明书

本发明属于分析检测领域，具体涉及一种高粱种皮关键呈色物质的鉴别及分析方法。具体为：首先对高粱种皮中的呈色物质进行有效的提取、分离，再通过高效液相色谱结合紫外可见光谱特征确定关键呈色物质，最后通过超高效液相色谱‑飞行时间质谱联用仪进一步确认关键呈色物质的碎片离子特征，采用以上光谱、色谱、质谱相结合的技术手段在高粱中鉴别出了2种关键呈色物质——木犀草定和芹菜定。本发明建立了一种高粱种皮关键呈色物质的鉴别及分析方法，能快速、准确的鉴别高粱种皮中具有主要呈色贡献的化合物，为高粱的色泽品质研究提供了良好的技术指导和数据支持，有助于建立科学的高粱籽粒色泽判别标准，为高粱资源的有效利用提供新思路。

技术领域

本申请属于分析检测领域，具体涉及一种高粱种皮关键呈色物质的鉴别及分析方法。

背景技术

不同品种高粱种皮颜色具有差异，常见的高粱种皮颜色有白色、黄色、红色或棕色、 黑色等。传统认为高粱种皮的颜色与单宁有关，且所有具有红色/褐色种皮的高粱都含有单 宁。因此在高粱籽粒的使用方式上，种皮颜色是一项很重要的评价依据：作为饲料时，单 宁的存在会降低动物的消化效率，因此食用高粱多为白色或黄色种皮；但高粱作为酿酒原 料时，单宁的存在对酿造品质有着积极的影响，经发酵后生成酒体中重要的呈香物质，因 此酿酒高粱多选用红色种皮品种。但现代研究表明，种皮颜色及其色泽强度并不完全是高 粱单宁含量高低的可靠指标，浅色高粱籽粒中同样有一定含量的单宁；因此，有必要对高 粱种皮中的呈色物质进行鉴别及分析，以正确区分高粱色泽和单宁含量这两种不同的性状， 建立高粱种皮颜色的科学评价指标。在文献报道中，植物种皮主要的呈色物质为花色素及 其糖苷类，但目前还没有花色素种类与高粱种皮颜色关系的报道。目前对于高粱种皮颜色 的判断主要依靠人工感官，缺乏科学的定量指标，因此，开发一种高粱关键呈色物质的鉴 别及分析方法，有助于建立科学的高粱色泽评价体系，为不同用途高粱的选育提供指导， 促进高粱种质资源的高效利用。

发明内容

一方面，本申请提供了木犀草定和/或芹菜定在鉴别高粱种皮颜色中的应用。

一方面，本申请提供了一种鉴别高粱种皮呈色物质的方法，包括以下步骤：

S1、将高粱样品磨碎后过筛网，制备高粱粉；

S2、向步骤S1中制备的高粱粉中加入冰乙醇振荡提取；

S3、步骤S2提取结束后离心，取上清V1；

S4、将步骤S3取上清后的残渣重复步骤S2-S3 2次，取得上清V2、V3；

S5、合并上清V1、V2、V3，第一次过滤，除去乙醇，冻干，复溶，第二次过滤；

S6、将步骤S5制得的样品进行HPLC-TOF-MS分析。

在一些实施方案中，所述步骤S1中，将高粱样品磨碎后过0.5-3mm筛网；在一些实施方案中，过1mm筛网。

在一些实施方案中，所述步骤S2中，高粱粉与冰乙醇的质量体积比为：(1-5)g：(20-50) ml；在一些实施方案中，为1g：15ml。

在一些实施方案中，所述冰乙醇为60-90％的冰乙醇；在一些实施方案中，为80％的 冰乙醇。

在一些实施方案中，所述步骤S3中摇床振荡提取10-20min；在一些实施方案中，摇床振荡提取15min。

在一些实施方案中，2500-3500rpm转速下离心5-15min；在一些实施方案中，3000rpm 转速下离心10min。

在一些实施方案中，所述步骤S5中，第一次过滤用0.45μm滤膜；在一些实施方案中， 在40-60℃下旋蒸除去乙醇；在一些实施方案中，在45℃下旋蒸除去乙醇；在一些实施方 案中，第二次过滤用0.22μm滤膜。