[发明专利]一种CRISPR-SaCas9基因编辑系统及其应用有效
| 申请号： | 202110756753.5 | 申请日： | 2021-07-05 |
| 公开（公告）号： | CN113549650B | 公开（公告）日： | 2023-05-09 |
| 发明（设计）人： | 张孝兵;程涛;张健萍;杨智学;傅雅文 | 申请（专利权）人： | 天津协和生物科技开发有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/90;C12N15/62;C12N5/10;A61K48/00;A61K38/46 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 刘二艳 |
| 地址： | 300020 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 crispr sacas9 基因 编辑 系统 及其 应用 | ||
1.一种CRISPR-SaCas9基因编辑系统，其特征在于，所述CRISPR-SaCas9基因编辑系统包括：SaCas9载体、sgRNA载体和同源重组模板pDonor载体；
其中，所述SaCas9载体包括启动子、SaCas9编码基因、核定位信号HMGA2和BPNLS、Wpre和PolyA，所述核定位信号HMGA2和BPNLS分别为编码如SEQ ID NO.2和6所示的氨基酸序列的核酸；
所述sgRNA载体包括启动子、靶向序列和骨架结构；
所述靶向序列的长度为21或22nt；
所述sgRNA载体的骨架结构的核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示。
2.根据权利要求1所述的CRISPR-SaCas9基因编辑系统，其特征在于，所述SaCas9编码基因与核定位信号的连接序列为SEQ ID NO.16～18所述的核苷酸序列中的任意一种或至少两种的组合；
所述连接序列连接于SaCas9编码基因的N端和/或C端。
3.根据权利要求1所述的CRISPR-SaCas9基因编辑系统，其特征在于，所述SaCas9载体的启动子为EF1启动子、CAG启动子或CMV启动子中的任意一种。
4.根据权利要求1所述的CRISPR-SaCas9基因编辑系统，其特征在于，所述SaCas9编码基因编码的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示。
5.根据权利要求1所述的CRISPR-SaCas9基因编辑系统，其特征在于，所述sgRNA载体的启动子为U6启动子。
6.根据权利要求1所述的CRISPR-SaCas9基因编辑系统，其特征在于，所述同源重组模板pDonor载体包含供体DNA。
7.根据权利要求1～6任一项所述的CRISPR-SaCas9基因编辑系统，其特征在于，所述SaCas9载体为质粒、腺病毒载体或慢病毒载体的任意一种；
所述sgRNA载体为质粒、腺病毒载体或慢病毒载体的任意一种；
所述同源重组模板pDonor载体为质粒、腺病毒载体或慢病毒载体的任意一种。
8.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包含如权利要求1～7任一项所述的CRISPR-SaCas9基因编辑系统。
9.根据权利要求8所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为人原代细胞；
所述人原代细胞为人诱导多能干细胞、人原代T细胞或人造血干细胞中的任意一种。
10.如权利要求1～7任一项所述的CRISPR-SaCas9基因编辑系统在制备基因编辑的药物中的应用。
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