[发明专利]一种用因子法从外周血中扩增NK细胞的培养基及方法

权利要求书

1.一种用因子法从外周血中扩增NK细胞的培养基，其特征在于，包括包被液、刺激培养基和扩增培养基，所述包被液包括DPBS磷酸缓冲液、NKp46和CD137，所述刺激培养基包括K581基础培养基、IL-2、IL-18、IL-15、IL-21、OK432、IFN-γ、NEAA、谷氨酰胺、PHA和自体灭活血浆，所述扩增培养基包括K581基础培养基、IL-2和AB血清。

2.根据权利要求1所述的一种用因子法从外周血中扩增NK细胞的培养基，其特征在于，所述包被液中NKp46、CD137的终浓度为1-5ug/mL，所述刺激培养基中IL-2的终浓度为1000-2000U/mL、IL-18的终浓度为5-20ng/mL、IL-15的终浓度为5-20ng/mL、IL-21的终浓度为5-20ng/mL、OK432的终浓度为50-200ng/mL、IFN-γ的终浓度为50-200ng/mL、PHA的终浓度为0.1-1ug/mL、NEAA的终浓度为1％、谷氨酰胺的终浓度为1％、自体灭活血浆的体积分数为10％，所述扩增培养基中IL-2的终浓度为500-1000U/mL、AB血清的体积分数为10％。

3.根据权利要求1所述的一种用因子法从外周血中扩增NK细胞的培养基，其特征在于，所述包被液中NKp46、CD137的终浓度比为1∶1，所述刺激培养基中IL-2、IL-18、IL-15、IL-21、OK432、IFN-γ和PHA的终浓度比为10∶1∶1∶1∶10∶10∶0.02。

4.根据权利要求1所述的一种用因子法从外周血中扩增NK细胞的培养基，其特征在于，所述包被液中NKp46的终浓度为3ug/mL、CD137的终浓度为3ug/mL，所述刺激培养基中IL-2的终浓度为1000U/mL、IL-18的终浓度为10ng/mL、IL-15的终浓度为10ng/mL、IL-21的终浓度为10ng/mL、OK432的终浓度为100ng/mL、IFN-γ的终浓度为100ng/mL、PHA的终浓度为0.5ug/mL，所述扩增培养基中IL-2的终浓度为800U/mL。

5.一种用因子法从外周血中扩增NK细胞的方法，其特征在于，具体步骤如下：

A：包被阶段：包被液包被需要使用的NK扩增培养瓶；

B：刺激阶段：刺激培养基刺激NK细胞；

C：扩增阶段：扩增培养基扩增NK细胞。

6.根据权利要求5所述的一种用因子法从外周血中扩增NK细胞的方法，其特征在于，提前一天使用包被液包被NK扩增瓶在4℃包被1天。

7.根据权利要求5所述的一种用因子法从外周血中扩增NK细胞的方法，其特征在于，包被阶段的包被液包被的的第0天至第1天，不适用任何培养基,刺激阶段使用刺激培养基激活NK细胞，从第1天至第4天，期间不换液，扩增阶段使用扩增培养基扩增NK细胞，从第4天开始，隔1天对细胞进行计数并补加培养基。

8.根据权利要求5所述的一种用因子法从外周血中扩增NK细胞的方法，其特征在于，单个核细胞接种量为1×10⁶-2×10⁶/ml，起始接种5ml。

9.根据权利要求5所述的一种用因子法从外周血中扩增NK细胞的方法，其特征在于，外周血也包括脐带血。