[发明专利]一种抗多发性硬化的重组蛋白及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种抗多发性硬化的重组蛋白，其特征在于，该重组蛋白包括HSP65和6MOG_35-55，所述HSP65蛋白和六段抗原表位多肽MOG_35-55之间以Ala-Ser-Ala柔性接头连接；

所述重组蛋白序列为SEQ ID NO.1。

2.一种抗多发性硬化的重组蛋白的制备方法，其特征在于，该方法用于制备权利要求1所述的抗多发性硬化的重组蛋白；该方法包括以下步骤：

(1)构建重组质粒pET28a-His-HSP65-6MOG_35-55，获得具有该重组质粒的工程菌；

(2)对以LB培养基工程菌进行培养，当菌体达到对数生长期时，培养基中加入无菌0.5mol/L乳糖溶液至终浓度为5mmol/L，继续培养7小时后收集菌体；

(3)以收集的菌体分离融合蛋白和对融合蛋白纯化，得到所述的抗多发性硬化的重组蛋白。

3.根据权利要求2所述的抗多发性硬化的重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)包括以下步骤：

将6MOG_35-55的密码子插入pET-28a(+)，获得质粒pET28a-6MOG_35-55；

以为质粒pET28a-6MOG_35-55模板进行PCR，扩增获得编码6MOG_35-55序列的目的基因片段；

将pET28a-His-HSP65-6P277载体经NheI、HindIII双酶切，得到线性化克隆载体；

将编码6MOG_35-55序列的目的基因片段和线性化克隆载体重组，得到重组质粒，将重组质粒转化到感受态细胞并以PCR进行阳性克隆的筛选，对筛选所得阳性克隆体进行验证，最终得到具有该重组质粒的工程菌。

4.根据权利要求2所述的抗多发性硬化的重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中：

取收集的菌体裂解和冰上超声破碎，分别取上清液和沉淀进行分析，确定融合蛋白为包涵体；

以含有尿素的包涵体溶解液处理包涵体，收集上清液，用Ni-NTA琼脂糖凝胶柱纯化目的蛋白，得到重组蛋白His-HSP65-6MOG_35-55。

5.权利要求1所述的抗多发性硬化的重组蛋白用于制备多发性硬化疫苗。

6.权利要求5所述的抗多发性硬化的重组蛋白的用途，所述多发性硬化疫苗以滴鼻方式施用。