[发明专利]一种高效构建cDNA文库的方法

权利要求书

1.一种高效构建cDNA文库的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：将寡脱氧胸苷酸引物和总RNA混合物注入低盐缓冲液中退火，然后加入以链霉亲和素包被的磁性球珠，之后通过磁分离器从低盐缓冲液分理出磁性球珠，再加入洗脱缓冲液，重复磁性分离步骤，将寡脱氧胸苷酸引物从mRNA中解离获得杂合分子；

S2：将S1中获得的杂合分子通过反转录酶催化获得第一条cRNA链，之后用核糖核酸酶水解杂合分子中的RNA链，获得小片段RNA为合成第二条cRNA链的引物，之后加入DNA聚合酶和四种脱氧核糖核苷酸三磷酸，最后加入异柠檬酸脱氢酶和大肠杆菌DNA连接酶，将各片段连接获得第二条cRNA链；

S3：通过质粒和噬菌体载体制作克隆RNA的载体，使用末端转移酶对S2中获得的两条cRNA的端口添加均聚物(A)或(G)，然后对载体的端口添加均聚物(T)或(C),cRNA和末端和载体RNA末端退火后粘连，转化为重组分子；

S4：将S3中获得的重组分子经过基因培养转化后成为宿主细胞，将宿主细胞放置在琼脂平板上，通过琼脂平板中添加相应的筛选物质，直接鉴别筛选所含重组子的菌落。

2.根据权利要求1所述的一种高效构建cDNA文库的方法，其特征在于：所述S1中的低盐缓冲液和洗脱缓冲液均放置在玻璃材质的烧杯和试管内部，所述烧杯和试管的表面均通过高温焙烤，且烧杯和试管的表面均涂抹有0.1％焦碳酸二乙酯。

3.根据权利要求1所述的一种高效构建cDNA文库的方法，其特征在于：所述S2中第一条cRNA链的引物为六核苷酸引物，所述杂合分子中的RNA链通过碱溶液水解。

4.根据权利要求1所述的一种高效构建cDNA文库的方法，其特征在于：所述低盐缓冲液和洗脱缓冲液均通过煮沸过的冷却水配置，冷却水均通过焦碳酸二乙酯处理。

5.根据权利要求1所述的一种高效构建cDNA文库的方法，其特征在于：所述S2中的反应温度为37°，所述S1中的磁分离器为电磁铁。