[发明专利]一种野生茯苓的培育选种方法

权利要求书

1.一种野生茯苓的培育选种方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、野生茯苓寻找：找到野生茯苓活体，取茯苓菌核后用保鲜膜封好；

S2、培养基配制：取马铃薯150g、胡萝卜50g去皮切丁加水煎煮30min，煎煮后滤汁，加温水浸泡加入琼脂粉再加入葡萄糖加热搅拌，定容后分装到试管内，根据试管大小一般灌装到试管长度1/4位置，盖好试管塞，放入高压灭菌锅内，在121℃下灭菌40min；

S3、消毒接种：将步骤S1中取回的茯苓菌核用75％酒精对其表面进行消毒，再用无菌水清洗3次，在无菌条件下，用已消毒的手术刀划开菌核表面，用镊子挑取黄豆大小的菌核接到试管的培养基表面；

S4、菌种挑选：把步骤S2中接好种的试管放到培养箱内进行培养，培养温度25-28℃，湿度60-65％；

S5、母种扩繁：在无菌条件下把步骤S4中茯苓菌种用接种针接种到试管内培养基上，挑取量为4-5平方毫米；

S6、原种培养配制：原种培养基为固体培养基，主要由小麦、玉米面、谷糠以及松树锯末等构成，添加剂为葡萄糖和石膏；

S7、灭菌处理一：把步骤S6中制备好的原种菌包放放入高压灭菌锅内灭菌，压力0.12MPa-0.15MPa，121℃保持4h，后保压4h，取出冷却，备用；

S8、接种处理一：在无菌环境下把试管种内母种用接种钩接到已冷却菌包内；

S9、培养处理：在避光环境下，温度为25℃左右对接好种的步骤S6中的原种菌包进行培养，一般20至25天长满；

S10、生产培养配制：生产培养基为固体培养基，主要由小麦、玉米面、谷糠、松树锯末等构成，添加剂为葡萄糖和石膏；

S11、灭菌处理：把步骤S10中的原种菌包放放入高压灭菌锅内灭菌，压力0.12MPa-0.15MPa，121℃保持4h，后保压4h，取出冷却；

S12、接种处理：在无菌环境下把无污染已长满的原种接种到已冷却菌包内，完成培育选种操作，每包原种可接生产种30包左右。

2.根据权利要求1所述的一种野生茯苓的培育选种方法，其特征在于，所述步骤S2中排气后趁热取出摆放斜面，斜面离棉花塞2cm为宜,待培养基冷却凝固后即可使用。

3.根据权利要求1所述的一种野生茯苓的培育选种方法，其特征在于，所述步骤S4中培养时注意观察并及时挑出污染菌种，选择长势快，菌丝浓密，气生菌丝较多的作为母种。

4.根据权利要求1所述的一种野生茯苓的培育选种方法，其特征在于，所述步骤S5中试管内菌丝长满后可进行3到4次转管扩大母种数量，一般每支试管可转接30支左右。

5.根据权利要求1所述的一种野生茯苓的培育选种方法，其特征在于，所述步骤S5中在扩繁过程中淘汰生产缓慢、菌丝稀疏、无气生菌丝的母种。

6.根据权利要求1所述的一种野生茯苓的培育选种方法，其特征在于，所述步骤S6中小麦、玉米面的含量为40％，整体含水量为40-50％，灌装到聚丙烯袋子内，并加上套环以及有海绵透气口的盖子。

7.根据权利要求1所述的一种野生茯苓的培育选种方法，其特征在于，所述步骤S8中每支试管可接5包。

8.根据权利要求1所述的一种野生茯苓的培育选种方法，其特征在于，所述步骤S10中小麦、玉米面、玉米等含量为30％以上，整体含水量为40-50％。灌装到聚丙烯袋子内，并加上套环以及有海绵透气口的盖子。