[发明专利]表达牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因的重组牛结节疹病毒及其应用有效
| 申请号： | 202110764833.5 | 申请日： | 2021-07-06 |
| 公开（公告）号： | CN113388588B | 公开（公告）日： | 2023-07-07 |
| 发明（设计）人： | 贺笋;李俊辉;潘毅平;赵毅;程兰玲;张伟;唐慧芬;张慧敏;张志鹏 | 申请（专利权）人： | 天康制药股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/38;C12N15/63;A61K39/275;A61K39/265;A61K9/19;A61K47/42;A61K47/26;A61K47/10;A61K47/18;A61P31/20;A61P31/22 |
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| 地址： | 215000 江苏省苏州市中国（江苏）自由贸易试验区*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 表达 疱疹病毒 gb 基因 重组 结节 病毒 及其 应用 | ||
1. 一种预防牛结节疹和牛传染性鼻气管炎二联疫苗，其特征在于，活性成分为重组牛结节疹病毒，所述重组牛结节疹病毒为含有牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因的牛结节疹病毒；所述牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因插入在牛结节疹病毒的TK基因中破坏所述TK基因的功能；所述牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因连有第一启动子。
2.根据权利要求1所述的二联疫苗，其特征在于，第一启动子选自p7.5或p11。
3.根据权利要求2所述的二联疫苗，其特征在于，牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因的核苷酸序列5’或3’端连接有报告基因，报告基因连有第二启动子，第二启动子与第一启动子不同。
4.根据权利要求3所述的二联疫苗，其特征在于，第二启动子选自p7.5或p11。
5.根据权利要求3所述的二联疫苗，其特征在于，报告基因选自eGFP、gpt或LacZ。
6. 权利要求1~5所述二联疫苗的制备方法，其特征在于，将含有SEQ ID NO.1的质粒导入牛结节疹病毒感染的细胞中，培养筛选得到所述重组牛结节疹病毒。
7. 根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，质粒为pSP72或pBluescript II SK(-)。
8. 根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，将含有SEQ ID NO.1的质粒导入牛结节疹病毒感染的羊睾丸细胞中。
9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，将重组牛结节疹病毒在Vero全悬浮细胞上培养，得到重组牛结节疹病毒。
10.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，将重组牛结节疹病毒与冻干保护剂混匀，冻干得到所述二联疫苗。
11. 根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，冻干保护剂包括：1-3%海藻糖、1-3%右旋糖酐、0.5-1.5%甘露醇、0.5-1.5%聚乙二醇4000、1-3%冷水鱼明胶、0.05-2%Tween 80和90-110nmol甘氨酸。
12.权利要求1-5中任一项所述的重组牛结节疹病毒在制备预防牛结节疹和牛传染性鼻气管炎的二联疫苗中的应用。
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