[发明专利]表达牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因的重组牛结节疹病毒及其应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体而言，提供了一种表达牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因的重组牛结节疹病毒及其应用。本发明提供的重组牛结节疹病毒，其中含有SEQ ID NO.1所示的牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因，该病毒兼具两种病毒的抗原表位，以此作为活载体疫苗可以实现直接接种，避免了灭活、佐剂乳化等操作，对牛结节疹病毒和牛传染性鼻气管炎病毒均具有良好的免疫原性，实现“一针两防”。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种表达牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因的重组牛结节疹病毒及其应用。

背景技术

牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-Ⅰ)属于α疱疹病毒，引起牛传染性鼻气管炎(IBR)，表现为呼吸道疾病、生殖道损害、流产甚至致命性系统感染等临床症状。BHV-Ⅰ的囊膜表面至少存在10种糖蛋白，其中糖蛋白gB是参与BHV-Ⅰ侵入宿主细胞机制的重要分子，为病毒复制所必需。同时，gB亦是刺激宿主免疫应答的主要抗原蛋白之一，能诱导宿主产生高水平的体液和细胞免疫反应。

结节性皮肤病(Lumpy skin disease，LSD)又称牛结节疹，牛结节性皮炎或牛疙瘩皮肤病，是由痘病毒科的结节性皮肤病病毒(Lumpy Skin Disease Virus，LSDV)引起的一种牛的急性或亚急性传染病。

目前，对于结节性皮肤病的防疫：将种毒接种到制备好的羊睾丸细胞上培养约72小时后收获，用灭活剂灭活后，与油佐剂乳化而成。

对于牛传染性鼻气管炎的防疫：一种是将牛传染性鼻气管炎病毒接种到DMBK细胞上培养约72小时后收获，用灭活剂灭活后，与油佐剂乳化而成；另外一种是CHO表达牛传染性鼻气管炎gB蛋白，收获后换液，与油佐剂乳化而成。

然而这些方案的疫苗都需要灭活后乳化制备，并且免疫后均只能对单种疫病进行预防。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种重组牛结节疹病毒。

本发明的第二目的在于提供上述重组牛结节疹病毒的制备方法。

本发明的第三目的在于提供上述重组牛结节疹病毒的培养方法。

本发明的第四目的在于提供上述重组牛结节疹病毒的应用。

本发明的第五目的在于提供一种预防牛结节疹和牛传染性鼻气管炎的疫苗。

本发明的第六目的在于提供上述疫苗的制备方法。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种重组牛结节疹病毒，所述重组牛结节疹病毒为含有牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因的牛结节疹病毒；所述牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

进一步地，所述牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因插入在牛结节疹病毒的TK基因中，片段连接方式为TK1-gB-TK2，牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因连有第一启动子；

优选地，第一启动子包括p7.5或p11。

进一步地，牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因的核苷酸序列5’或3’端连接有报告基因，片段连接方式为TK1-gB-报告基因-TK2或TK1-报告基因-gB-TK2，报告基因连有第二启动子，第二启动子与第一启动子不同；

优选地，第二启动子包括p7.5或p11；

优选地，报告基因包括eGFP、gpt或LacZ。

进一步地，片段连接方式为TK1-gB-p7.5-p11-eGFP-TK2。

进一步地，片段p7.5-gB-TK1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，片段P11-eGFP-TK2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。