[发明专利]一种检测CAR-T细胞scFv亲和力的方法

权利要求书

1.一种检测CAR-T细胞scFv亲和力的方法，其中，将CAR-T细胞与靶抗原⁺细胞混合后共同孵育，流式法检测CAR-T细胞scFv与靶抗原⁺细胞的亲和力；根据流式法检测到的CAR-T细胞scFv与靶抗原⁺细胞的结合呈现形式来判断CAR-T细胞scFv与靶抗原⁺细胞的亲和力大小；

判断CAR-T细胞scFv与靶抗原⁺细胞的亲和力大小的方法为：

(1) 若流式细胞检测中呈现为CD3^-靶抗原^-细胞和CD3⁺靶抗原^-细胞，则判断CAR-T细胞scFv与靶抗原⁺细胞具有很强的亲和力；

(2) 若流式细胞检测中呈现为CD3^-靶抗原⁺细胞、CD3⁺靶抗原⁺细胞和CD3⁺靶抗原^-细胞，则判断CAR-T细胞scFv与靶抗原⁺细胞具有相对较强的亲和力；

(3) 若流式细胞检测中呈现为CD3⁺靶抗原^-细胞和CD3^-靶抗原⁺细胞，则判断CAR-T细胞scFv与靶抗原⁺细胞的亲和力较弱或无特异性亲和力；

CAR-T细胞scFv与靶抗原⁺细胞的结合呈现上述三种不同等级，其亲和力大小为（1）＞（2）＞（3）；

其中，“靶抗原⁺细胞”是指在其细胞表面表达靶抗原的细胞；

“CD3⁺靶抗原^-细胞”是指这样的T细胞或CAR-T细胞，该细胞的膜表面有CD3分子，但其细胞表面不表达靶抗原；或者，是指这样的CAR-T细胞，其识别靶抗原后，将靶抗原吸收并进行内化进入了细胞内；

“CD3^-靶抗原⁺细胞”是指这样的靶细胞，该细胞表面表达靶抗原或部分靶抗原被CAR-T细胞识别并夺取，但该细胞的膜表面无CD3分子；

“CD3⁺靶抗原⁺细胞”是指这样的CAR-T细胞，该细胞的膜表面有CD3分子，且该细胞与靶细胞表面的部分靶抗原结合后形成复合体或成功夺取靶抗原但还未进行内化；

“CD3^-靶抗原^-细胞”是指这样的靶细胞，该细胞表面的全部靶抗原被CAR-T细胞识别并夺取，且该细胞的膜表面无CD3分子。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，若流式法检测到的CAR-T细胞scFv与靶抗原⁺细胞的结合呈现形式为第(1)种情况，CAR-T细胞scFv与靶抗原⁺细胞的亲和力的计算如下：

；

其中n=CAR-T细胞与靶抗原⁺细胞混合后共同孵育的时间，第0小时靶抗原⁺细胞的比例和第n小时靶抗原⁺细胞的比例均是通过流式法检测得到。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，若流式法检测到的CAR-T细胞scFv与靶抗原⁺细胞的结合呈现形式为第(2)种情况，CAR-T细胞scFv与靶抗原⁺细胞的亲和力的计算如下：

；

其中n=CAR-T细胞与靶抗原⁺细胞混合后共同孵育的时间，第n小时CD3⁺靶抗原⁺细胞的比例和第0小时CD3⁺靶抗原⁺细胞的比例均是通过流式法检测得到。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述CAR-T细胞与靶抗原⁺细胞混合后，在35~38℃和3~8%CO₂中共同孵育。