[发明专利]一种检测CAR-T细胞scFv亲和力的方法

说明书

本发明涉及一种检测CAR‑T细胞scFv亲和力的方法，将CAR‑T细胞与靶抗原⁺细胞混合后共同孵育，流式法检测CAR‑T细胞scFv与靶抗原⁺细胞的亲和力。本发明采用流式法直接检测CAR‑T细胞scFv与靶抗原⁺细胞的亲和力，准确地反映了CAR‑T细胞对靶抗原⁺细胞的识别效应。

技术领域

本发明涉及细胞治疗技术领域，尤其涉及一种检测CAR-T细胞scFv亲和力的方法。

背景技术

目前，检测目标蛋白（例如CAR-T细胞scFv）对相应靶抗原亲和力的方法主要有SPR（surface plasmon resonance，表面等离子体共振）技术，主要操作过程为：首先将待测抗体所识别的抗原偶联在传感芯片表面，然后注入待测抗体，通过芯片表面直接监测抗体-抗原结合过程，利用分析软件提供反应动力学常数及亲和力等数据。现有专利（申请公布号：CN111351936A）公开了一种CD19-CAR亲和力检测方法，具体为：首先构建一种高表达CD19的稳定细胞株，然后检测不同浓度的CD19抗体（该抗体来源于CD19 CAR-T中scFv序列）分别与CD19阳性细胞的亲和力，同时检测不同浓度的CD19蛋白与CD19 CAR-T细胞的亲和力。

而目前检测CAR-T细胞scFv亲和力的方法脱离了CAR-T细胞而直接检测scFv蛋白对目标靶抗原的结合能力，即将scFv蛋白从CAR-T细胞分离纯化出来，然后检测scFv蛋白对目标靶抗原的亲和力，却忽略了CAR-T细胞与靶抗原细胞（例如肿瘤细胞）结合时所产生的空间位阻效应，无法真实反映CAR-T细胞对靶抗原细胞的亲和力，进而无法准确检测出CAR-T细胞对相应靶抗原⁺细胞的亲和力，影响后续CAR-T细胞产品研发的进度。亟需一种能够准确检测CAR-T细胞scFv亲和力的方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是提出一种检测CAR-T细胞scFv亲和力的方法，本发明采用流式法直接检测CAR-T细胞scFv与靶抗原⁺细胞的亲和力，准确地反映了CAR-T细胞对靶抗原⁺细胞的识别效应。

基于上述目的，本发明的第一个方面提供了一种检测CAR-T细胞scFv亲和力的方法，将CAR-T细胞与靶抗原⁺细胞混合后共同孵育，流式法检测CAR-T细胞scFv与靶抗原⁺细胞的亲和力。

在本发明的优选的实施方案中，根据流式法检测到的CAR-T细胞scFv与靶抗原⁺细胞的结合呈现形式来判断CAR-T细胞scFv与靶抗原⁺细胞的亲和力大小。

在本发明的优选的实施方案中，判断CAR-T细胞scFv与靶抗原⁺细胞的亲和力大小的方法为：

(1) 若流式细胞检测中呈现为CD3^-靶抗原^-细胞和CD3⁺靶抗原^-细胞，则判断CAR-T细胞scFv与靶抗原⁺细胞具有很强的亲和力；

(2) 若流式细胞检测中呈现为CD3^-靶抗原⁺细胞、CD3⁺靶抗原⁺细胞和CD3⁺靶抗原^-细胞，则判断CAR-T细胞scFv与靶抗原⁺细胞具有相对较强的亲和力；

(3) 若流式细胞检测中呈现为CD3⁺靶抗原^-细胞和CD3^-靶抗原⁺细胞，则判断CAR-T细胞scFv与靶抗原⁺细胞的亲和力较弱或无特异性亲和力。