[发明专利]用于子宫内膜癌早期筛查人外周血循环肿瘤DNA中TMEM101基因甲基化检测试剂盒

权利要求书

1.一种用于子宫内膜癌早期筛查的人外周血循环肿瘤DNA中TMEM101 基因甲基化检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒中包括：TMEM101 基因目的位点的甲基化特异引物；TMEM101基因特异的水解探针；内参基因的引物和内参基因的水解探针；所述TMEM101 基因目的位点为TMEM101基因转录起始位点上下游2000bp的区间中的至少一个CpG位点；所述内参基因为GAPDH或β-actin；所述试剂盒包括PCR预扩增反应体系和PCR 扩增反应体系；所述试剂盒所检测的靶区域选自TMEM101基因的转录起始位点上下游2000bp的全长区域或其中的部分区域；所述靶区域选自chr17: 42091709 – 42092100；所述试剂盒针对血液中cfDNA的检测; 所述TMEM101基因特异的水解探针为：5’- TTTTGCGAGTCGGGAG -3’，如SEQ ID NO.3所示。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，

所述靶区域适用于采用如下方法中的任意一种进行甲基化检测：甲基化特异性PCR、定量甲基化特异性PCR、亚硫酸氢盐测序法、甲基化特异性微阵列法、全基因组甲基化测序法、焦磷酸测序法、甲基化特异性高效液相层析法、数字PCR法、甲基化特异性高分辨率溶解曲线法、甲基化敏感性限制性内切酶法或荧光定量法。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述TMEM101基因目的位点的甲基化特异引物为：

正向引物：5’- GAAATATAGGTAAGGTATTGGGATGT -3’，如SEQ ID NO.1所示；

反向引物：5’- TTCCCCCACCRCTTCATTCTAT -3’ ，如SEQ ID NO.2所示。

4.如权利要求1 所述的试剂盒，其特征在于，所述内参基因的引物和内参基因的水解探针如下：

GAPDH ：

正向引物：5’- TTTGGAAGGGTTTSGTATGATTG 3’ ，如SEQ ID NO.4所示；

反向引物：5’- AACTTCCCTACCAAACTAACCTAACTTAAA -3’ ，如SEQ ID NO.5所示；

水解探针：5’- TGGGTAGTTTTGGAGTTTT -3’ ，如SEQ ID NO.6所示；

β-actin ：

正向引物：5’- GGTGATGGAGGAGGTTTAGTAAGTTT -3’ ，如SEQ ID NO.7所示；

反向引物：5’- CACCACCCAACACACAATAACAA -3’ ，如SEQ ID NO.8所示；

水解探针：5’- TGGATTGTGAATTTGTG -3’ ，如SEQ ID NO.9所示。

5.如权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于，所述TMEM101基因特异的水解探针和所述内参基因的水解探针5' 端报告荧光基团为FAM、VIC、TET、JOE、HEX、TAMRA、Texas Red、Rox、Cy5、Cy3 中的一种或多种；所述TMEM101 基因特异的水解探针和所述内参基因的水解探针3' 端的猝灭基团为MGB、BHQ1、BHQ2、TAMRA、DABCYL、ECLIPSE中一种或多种。

6.如权利要求1 所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括阴性质控品、阳性质控品和无模板对照。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性质控品为亚硫酸氢盐修饰的全甲基化人类基因组DNA，所述阴性质控品为亚硫酸氢盐修饰的非甲基化人类基因组DNA。