[发明专利]用于子宫内膜癌早期筛查人外周血循环肿瘤DNA中TMEM101基因甲基化检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于子宫内膜癌早期筛查的人外周血循环肿瘤DNA中TMEM101基因甲基化检测试剂盒，应用于子宫内膜癌的早期筛查，试剂盒中包括：TMEM101基因目的位点的甲基化特异引物；TMEM101基因特异的水解探针；内参基因的引物和内参基因的水解探针；所述TMEM101基因目的位点为TMEM101基因转录起始位点上下游2000bp的区间中的至少一个CpG位点；所述内参基因为GAPDH和β‑actin中的一种或者多种；所述试剂盒包括PCR预扩增反应体系和PCR扩增反应体系。本发明克服了现有技术过程繁琐，检测时间长，假阳性高，子宫内膜癌血液早期筛查无法溯源等技术上的不足，提供一种用于子宫内膜癌早期筛查的人外周血循环肿瘤DNA中TMEM101基因甲基化检测的试剂盒。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于子宫内膜癌早期筛查的人外周血循环肿瘤DNA 中TMEM101 基因甲基化的检测试剂盒。

背景技术

子宫内膜癌是一种常见的女性生殖道恶性肿瘤。随着人口平均寿命的增加以及生活习惯的改变，其发病率近20年呈持续上升和年轻化的趋势。在西方国家，子宫内膜癌发病率已经占据女性生殖系统恶性肿瘤的首位。在我国，作为继宫颈癌之后第二个常见的妇科恶性肿瘤，其发病率约占妇科恶性肿瘤的20%~30%，部分发达城市子宫内膜癌发病率已达妇科恶性肿瘤第一位。

按照《第4 版WHO 女性生殖器官肿瘤组织学分类》，子宫内膜癌被分为以下组织学类型：子宫内膜样腺癌、黏液性癌、浆液性癌、透明细胞癌、未分化癌、去分化癌、神经内分泌肿瘤及混合性癌。其中子宫内膜样腺癌按肿瘤细胞分化程度分为高、中及低分化（G1、G2 和G3），按照二分类法，G1 和G2 属于I型内膜癌，为雌激素依赖型，预后良好，而G3 及其他非子宫内膜样腺癌类型的肿瘤均属于II 型内膜癌，为非雌激素依赖型，预后较差。

子宫内膜癌诊断的金标准为子宫外转移灶或手术切除组织标本病理学检查，目前的方法均为侵入式的检查，会对病人造成一定的损伤。同时临床上缺少早期发现子宫内膜癌的特异性标志物。鉴于传统的子宫内膜癌筛查方法存在侵入性及低效性，所以现急需一种更加方便，更加精确的筛查方法来提高子宫内膜癌的筛查率。

DNA 甲基化是一个在胞嘧啶或腺嘌呤上添加一个甲基基团的生化过程，它在细胞由干细胞分裂、分化为特异组织时改变基因的转录和表达。DNA 甲基化主要发生在CpG 位点。哺乳动物中60％ -90％的CpG 位点是呈甲基化状态的。甲基化的CpG 位点经常成簇的存在，这些成簇的CpG 位点被称作CpG 岛。DNA 甲基化通过两种方式抑制基因的转录。第一种，DNA 甲基化阻断某基因转录因子的结合。第二种，甲基-CpG- 结合域蛋白(MBDs) 结合甲基化的DNA来招募其他蛋白至其位点，如组蛋白去乙酰化酶和其他染色质重塑蛋白，形成致密、失活的染色质( 异染色质)。

DNA 甲基化是肿瘤发展的重要要素，它与众多恶性肿瘤相关。在癌症中存在着低甲基化和超甲基化两种形式，他们在癌症发生机制中扮演着不同的角色。异常的超甲基化经常发生在基因的启动子区的CpG 岛，它可导致抑癌基因的转录沉默或失活。相反地，低甲基化则与染色体不稳定和失去遗传印记相关。