[发明专利]快速检测梅花鹿源性鹿产品的定量PCR试剂盒及制法

说明书

本发明属于物种鉴定技术领域，特别涉及一种快速检测梅花鹿源性鹿产品的定量PCR试剂盒及制法。引物及探针序列：上游引物P1：5’‑GGTGCTGGCCTCCAACAG‑3’；下游引物P2：5’‑GGTGGGCTCAGGTGATAGAGACT‑3’；探针P3：5’‑CATTCACCCACTAAACCCCCTAGAAGTCCC‑3’。本发明特异性引物设计合理，以Cytb基因为靶基因,建立一种基于TaqMan探针的实时荧光PCR技术特异鉴定梅花鹿物种的方法,为食品、中药材及保健品中梅花鹿源性成分的鉴别提供参考，具有很好的特异性，且更为直观、快速、灵敏、准确。

技术领域

本发明属于物种鉴定技术领域，特别涉及一种快速检测梅花鹿源性鹿产品的定量PCR试剂盒及制法。

背景技术

我国是世界上鹿科资源最丰富的国家之一,根据对鹿科动物进化的研究,鹿科动物的獐、麂、梅花鹿、马鹿、麋鹿、水鹿和白唇鹿的原产地均在中国，鹿也是我国传统的一种珍贵的药用动物,据《本草纲目》记载,鹿茸、鹿胎、鹿血、鹿肾、鹿筋、鹿心、鹿骨、鹿鞭等均是滋补营养食品亦可入药。鹿的种类虽然较多,但具有药用价值的主要指梅花鹿,我国历代本草著作及现代药典都将梅花鹿(Cervus nippon)的产品视为正品,其他鹿种的产品则多作为代用品、习用品或伪品。这其中又以梅花鹿最为珍贵,价格最高,如驯鹿、马鹿的鹿茸价格只有梅花鹿鹿茸的一半,因此导致目前市场上一些以驯鹿、马鹿等低价产品充当高价的梅花鹿产品,甚至用非鹿源的产品冒充梅花鹿产品,价格与药效的区别很大。鹿的种类很多,但有药用价值的主要是梅花鹿。目前我国仅有部分地区有少量野生梅花鹿,梅花鹿已被列为国家一级保护动物,而药用鹿茸、鹿血、鹿心现主要取自人工饲养的鹿。

目前鹿的品种鉴别主要依靠传统方法,主要包括直观性状鉴定和理化鉴定,很难准确判定鹿产品的真伪。2007年颁布的国家标准GB/T 21106-2007《动物源性饲料中鹿源性成分定性检测方法PCR方法》,是用普通PCR方法对鹿源性成分进行检测,但不能将梅花鹿与马鹿等其他鹿类区别开来,所用的PCR方法需要凝胶电泳过程,根据条带大小判断是否含有鹿类成分,该方法灵敏度低,操作较实时荧光PCR方法复杂,容易存在交叉污染。

发明内容

本发明的目的是克服上述不足问题，提供基于梅花鹿Cytb基因序列开发的梅花鹿源性成分荧光定量PCR鉴定方法形成的检测试剂盒，可以快速、准确鉴定梅花鹿源性产品，促进梅花鹿源性成分产品的鉴定工作，防止非鹿源的产品冒充梅花鹿产品,造成市场秩序混乱，真假难辨。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：快速检测梅花鹿源性鹿产品的定量PCR试剂盒，其特征在于：包括引物与探针的序列是：

上游引物P1：5’-GGTGCTGGCCTCCAACAG-3’；

下游引物P2：5’-GGTGGGCTCAGGTGATAGAGACT-3’；

探针P3：5’-CATTCACCCACTAAACCCCCTAGAAGTCCC-3’。

所述探针P3的5’端标记fam基团，3’端标记temra基团。

所述试剂盒还包括由其他试剂所组成的反应体系如下表1：

表1快速检测梅花鹿源性鹿产品的定量PCR试剂盒的反应体系

所述试剂盒的扩增反应条件：95℃预变性5min；95℃变性10s，60℃退火延伸40s，40个循环。

一种快速检测梅花鹿源性鹿产品的定量PCR试剂盒的应用，其特征在于：利用所述试剂盒对食品、中药材及保健品中梅花鹿源性成分进行定量PCR特异性检测。

所述梅花鹿源性成分定量PCR特异性检测方法为：