[发明专利]一种从河豚毒素生产的副产物中分离制备四种高纯度多不饱和脂肪酸单体的方法

说明书

本发明涉及一种从生产河豚毒素的副产品‑河豚鱼内脏油中分离制备四种高纯度多不饱和脂肪酸单体的方法。在用乙醇从河豚鱼内脏提取生产河豚毒素时，产生大量的河豚鱼内脏油副产品；本发明利用这些河豚鱼内脏油分离制备高纯度的二十碳四烯酸（Arachdonic acid,ARA）、二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid,EPA）、二十二碳五烯酸（docosapentaenoic acid,DPA）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）四种多不饱和脂肪酸单体；本发明利用河豚毒素生产中的副产品分离制备高纯度、高价值的多不饱和脂肪酸多不饱和脂肪酸单体，具有很高的经济价值；为多不饱和脂肪酸，特别是DPA的制备提供了一种新的来源；本发明的分离制备方法简单，制备过程中使用的溶剂可回收重复使用，无“三废”排放。

技术领域

本发明涉及一种动物体内功能成分的分离制备技术领域，尤其涉及河豚鱼内脏油中多不饱和脂肪酸单体化合物，特别是DPA单体的制备。

背景技术

多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acid, PUFA），包括二十碳四烯酸（或称花生四烯酸，Arachdonic acid, ARA）、二十碳五烯酸（Eicosapentaenoic acid, EPA）、二十二碳五烯酸（Docosapentaenoic acid, DPA）和二十二碳六烯酸（Docosahexaenoicacid, DHA）等，作为细胞膜的重要组成成分，在人体健康和营养中发挥重要的作用。同时，多不饱和脂肪酸也是一类重要的天然活性物质。研究表明，它们在预防心脑血管疾病、调节脂类代谢、抗癌、抗菌和抗炎症等方面具有特殊功效 (Shahidi and Ambigaipalan,2018)。EPA、DHA 和AA在生物界的分布较广，其制备相对比较容易。人们对多不饱和脂肪酸的研究也主要集中在这几种多不饱和脂肪酸上。DPA在生物界的分布较少，主要存在于某些海洋哺乳动物（如海豹、海狗）和微藻的油中。DPA在许多生物和食品中不存在或含量很低。而且DPA分离制备的难度很大，价格高达每克2000元。因此，有关DPA的研究则相对要少得多(Drouin, Rioux and Legrand, 2019)。

尽管 DPA、与 DHA、EPA和AA 的具有相似的结构，它们都有类似的生物活性和功能，但它们也各有一些不同的功能。研究表明，DPA在调节脂类代谢、增强内皮细胞迁移和抑制动脉硬化等方面发挥了比 EPA 和 DHA的更好的功效。其调节血脂功能比EPA高出数倍，有可能作为抗炎药物使用 (Dyall, 2015)。

早期报道，DPA主要存在于海豹、海狗海洋动物和微藻油中。近来的研究表明，DPA存在于更广泛的动物油脂中。DPA在海豹、海狗和微藻油中含量较高，一般为3-5%（曹淑兰等，1999；胡烨敏等，2015；石金娥等，2015），在其它动物油脂中的含量很低（曹淑兰等，1999；张立坚等，2011；高颐雄等，2015；赵超等，2017；庄海旗等，2020）。制备DPA或含DPA的多不饱和脂肪酸主要是以海豹油、海狗油和微藻油为原料。因此，制备DPA的原料受到限制。同时，多不饱和脂肪酸的分离纯化难度较大，很难获得高纯度的单体。

孙素玲（2004）发现，海狗油中含有30种脂肪酸，其中多不饱和脂肪酸总含量达20.97%。EPA、DHA和DPA的含量分别为4.61%，8.83%和3.30%。皂化后，EPA、DHA和DPA的含量分别为5.72%、10.55%和4.83%。徐世民等（2006）用分子蒸馏法富集海狗油中的多不饱和脂肪酸，得到 EPA、DPA和DHA 总含量为 54.86 % 的海狗油产品。