[发明专利]促细胞团消化解离液及细胞计数方法

说明书

本申请提供一种促细胞团消化解离液及细胞计数方法，所述促细胞消化解离液包括以质量百分比计的以下原料：聚乙二醇辛基苯基醚1％～5％；烷基糖苷0.1％～4％；非表面活性剂型磺基甜菜碱0.1％～1％；两性离子型去垢剂0.1％～1％；pH调节剂1％～10％；其余为水。该促细胞消化解离液可通过破坏细胞的脂质双分子层，溶解胞质和细胞膜，并破坏分子间的微弱结合键，从而实现细胞团的消化解离，对细胞团的解离效率高，使得本申请的细胞计数方法可实现对生物反应器内支架材料上培养细胞数量的快速、低成本测定。

技术领域

本申请涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种促细胞团消化解离液及细胞计数方法。

背景技术

生物反应器是细胞培养的关键设备，可以实现细胞及其附属生物制品的规模化培养，其中贴壁细胞的规模化培养需要依靠细胞培养支架材料以实现细胞在反应器中的定植。随着培养天数的增加，细胞可实现在反应器内的规模化高密度培养，在支架上形成紧密的细胞团样三维类组织结构。

目前，市面上售卖的通用消化液如胰酶、胶原酶等不仅成本高，还需要依赖细胞培养箱或其他恒温设备以达到酶活最佳温度37℃，并且通常还需要20-40min才能实现对细胞团的完全消化解离。

发明内容

本申请的主要目的旨在提供一种消化解离效果好、解离速度快的促细胞团消化解离液。

本申请的另一目的旨在提供一种采用上述促细胞团消化解离液的细胞技术方法。

为了实现上述目的，本申请提供以下技术方案：

作为第一方面，本申请涉及一种促细胞团消化解离液，包括以质量百分比计的以下原料：

进一步设置：所述聚乙二醇辛基苯基醚以质量百分比计的含量为1％～2％。

进一步设置：所述两性离子型去垢剂为3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐或3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-2-羟基-1-丙磺酸。

进一步设置：所述pH调节剂为正磷酸。

进一步设置：所述pH调节剂以质量百分比计的含量为4％～5％。

作为第二方面，本申请涉及一种细胞计数方法，包括以下步骤：

将载有细胞的载体从生物反应器中转移到离心管内；

添加磷酸缓冲盐溶液至所述离心管内以清洗载体，清洗完毕后除去磷酸缓冲盐溶液；

添加促细胞团消化解离液至所述离心管内处理并促使细胞团解离，所述促细胞团消化液为如上的促细胞团消化解离液；

加入染色剂对细胞核进行染色；

将离心管内样品稀释至计数器的工作范围，通过对细胞核计数以完成细胞的计数。

进一步设置：所述载有细胞的载体为细胞培养支架材料，所述细胞在所述细胞培养支架材料上成细胞团样三维类组织结构设置。

进一步设置：多次添加磷酸缓冲盐溶液至所述离心管内以对细胞的载体进行反复冲洗。

进一步设置：所述添加促细胞团消化解离液至所述离心管内后，对所述离心管内样品涡旋0.8～1.5min或者静置2～3min。

进一步设置：所述染色剂为台盼蓝，且所述台盼蓝的终浓度为0.03～0.05％

相比现有技术，本申请的方案具有以下优点：