[发明专利]一种蒽醌类坏死探针靶向机制的研究方法及应用

权利要求书

1.一种蒽醌类坏死探针坏死靶向机制的研究方法，其特征在于，包括以下步骤：在蒽醌化合物上修饰上可发生生物正交反应或点击化学反应的基团，并保证其不影响其正常的靶向功能和生理作用，将修饰了生物正交反应基团或点击化学反应基团的蒽醌分子与细胞或组织充分接触，再加入修饰了能与之发生正交反应或点击化学的对应基团的荧光分子，利用细胞水平或在体的生物正交反应或点击反应将荧光基团标记到化合物上，从而对蒽醌类化合物组织、细胞甚至细胞器分布情况近视示踪。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述发生的点击化学的基团是指能够在铜离子催化下形成偶联反应的基团，叠氮基和炔基，或者是不需要金属催化，能够在生理条件下发生的生物正交反应的基团，如环辛烯基团和四氮唑基团。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述修饰过相应基团的荧光分子是带有能与环辛烯发生反应的四氮唑化合物，或者是能与四氮唑基团发生反应的环辛烯化合物，或是能与叠氮基团形成三唑环的炔基化合物，或者是带有能与炔基形成三唑环的叠碳化合物，并且其自身具备发荧光特性或含有标签基团。

4.根据权利要求1所述的方法，在蒽醌类坏死探针上修饰的用于发生点击化学反应的环辛烯、四氮唑、叠氮基或炔基应不影响或尽可能不影响该探针原有的坏死靶向功能。

5.根据权利要求4所述的方法，应用核素标记等方法测定蒽醌类坏死探针叠氮基或炔基修饰前后的坏死靶向能力，筛选出坏死靶向能力保持的化合物用于后续机制研究。

6.根据权利要求1所述的方法，在含有坏死细胞的培养液中，添加带有环辛烯、四氮唑、叠氮基或炔基的化学修饰连接剂的蒽醌坏死探针，室温反应，并用PBS溶液洗去未结合的坏死探针；加入对应的带有四氮唑、环辛烯、炔基或者叠氮基的荧光分子，室温反应，并用PBS溶液洗去多余的荧光分子，通过激光共聚焦仪器进行成像。

7.根据权利要求1所述的方法，基于后标记的点击化学的方法在蒽醌类坏死探针细胞水平机制研究。

8.根据权利要求7所述的方法，蒽醌类坏死探针包括金丝桃素类坏死探针、大黄酸类坏死探针。