[发明专利]一种乳粉加工环境中蜡样芽胞杆菌的溯源方法

说明书

本发明一种乳粉加工环境中蜡样芽胞杆菌的溯源方法，属于食品安全技术领域。本发明提供的方法的具体步骤为：对婴幼儿配方乳粉原辅料、生产环境中和生产接触到的物质表面的细菌进行分离；对分离菌株进行DNA的提取；利用通用引物FA‑27F和RA‑1492R进行16S rRNA序列的PCR扩增后鉴定蜡样芽胞杆菌；利用引物panC‑F引物为和panC‑R引物进行panC基因的PCR扩增后鉴定蜡样芽胞杆菌；进行生理生化实验分析；对蜡样芽胞杆菌进行分型；利用SPSS软件的相关性分析完成对婴幼儿配方乳粉中蜡样芽胞杆菌的进行溯源分析。可为减少婴幼儿配方乳粉加工环境中的蜡样芽孢杆菌污染提供一定的理论基础。

技术领域

本发明食品安全技术领域，具体涉及一种乳粉加工环境中蜡样芽胞杆菌的溯源方法。

背景技术

婴幼儿配方乳粉作为母乳的首要替代物，是婴幼儿重要的摄食来源，为婴幼儿健康成长和发展提供几乎全部的蛋白质、脂质、维生素、矿物质等营养物质。婴幼儿配方乳粉要求是一个无有害菌的产品，而其生产所用的原辅料容易污染细菌，其生产过程也并不是一个绝对无菌的环境。正是由于加工过程中这种非绝对无菌特点，导致婴幼儿配方乳粉可能被来源于原辅料以及生产过程中的病原菌污染，进而对婴幼儿健康产生不良影响。目前对婴幼儿配方乳粉中细菌的防控局限于对成品或原辅料、生产环境的单一检测单一防控，不能达到从根源上追溯成品中细菌来源，针对性防控的目的。

虽然乳制品的加工生产过程已经得到了严格的监管和控制，但仍有大量研究发现蜡样芽孢杆菌在多种乳制品中被检出，涵盖范围较广，包括原料乳、巴氏杀菌奶、乳粉、冰淇淋等。有研究发现，蜡样芽孢杆菌在美国，土耳其和巴西的乳制品中的检出率分别达到17.64％，20％和24.23％。Zhou等人研究发现蜡样芽孢杆菌在巴氏杀菌牛奶中被检出，MPN平均值为11.7CFU/mL，且不同季节牛奶样品的污染率变化较大，为33.3％-71.4％。Cui等人对北京当地的10家奶牛牧场进行采样检测，结果显示原料乳中蜡样芽孢杆菌的检出率高达9.8％，且nhe、hbl和ces基因的检出率分别为100％、55.0％和5.0％。近年来，蜡样芽孢杆菌在婴幼儿食品中也被检出。Zhang等人于2013-2015年采集65个品牌共401份婴幼儿配方乳粉，蜡样芽孢杆菌的检出率为8.2％。这些研究与结果均说明蜡样芽孢杆菌是污染乳制品中的重要微生物之一，可能导致食源性疾病的爆发，特别是受该致病菌污染的婴幼儿配方乳粉会对婴幼儿的安全与健康造成严重的威胁。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种在乳粉加工环境中蜡样芽胞杆菌的溯源方法，解决有针对性防控芽胞杆菌在乳制品中的危害。

本发明提供了一种乳粉加工环境中蜡样芽胞杆菌的溯源方法，所述方法的具体步骤如下：

(1)对婴幼儿配方乳粉原辅料、生产环境中和生产接触到的物质表面的细菌进行分离；

(2)对分离菌株进行DNA的提取；

(3)利用通用引物FA-27F：5'-AGTCTCTGATCATGCCTCAG-3'和RA-1492R：5'-AAGGAGGTGCTCCAGCC-3'，进行16S rRNA序列的PCR扩增后鉴定蜡样芽胞杆菌；

(4)利用引物panC-F引物为TYGGTTTTGTYCCAACRATGG和panC-R引物为CATAATCTACAGTGCCTTTCG进行panC基因的PCR扩增后鉴定蜡样芽胞杆菌；

(5)进行生理生化实验分析：

(6)持家基因PCR扩增并对蜡样芽胞杆菌进行分型；

(7)利用SPSS软件的相关性分析完成对婴幼儿配方乳粉中蜡样芽胞杆菌的进行溯源分析。

进一步地限定，步骤(1)按照TIANamp细菌基因组DNA提取试剂盒要求的具体方法对分离菌株进行DNA的提取。