[发明专利]一种从乌骨鸡组织中高效提取黑色素的方法有效
| 申请号： | 202110774997.6 | 申请日： | 2021-07-08 |
| 公开（公告）号： | CN113354957B | 公开（公告）日： | 2023-01-17 |
| 发明（设计）人： | 陈思睿;翟尚昆;吕慧娇;王涛 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C09B61/00 | 分类号： | C09B61/00;C09B67/54 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 陈波 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 乌骨鸡 组织 高效 提取 黑色素 方法 | ||
1.一种从乌骨鸡组织中提取黑色素的方法，其特征在于，所述方法步骤为：
组织样绞碎：
（1）取100g乌骨鸡组织样剪成小块，用双蒸水清洗除去血渍和其他污渍，4000rpm离心2次，时间10min；
（2）将步骤（1）所得沉淀悬浮于500ml 2% TritonX-100的PBS溶液中，常温下摇匀30min，4000rpm离心10min；所述2% TritonX-100的PBS溶液的pH为7.2-7.4，配置后4℃保存；
（3）将步骤（2）所得沉淀用500ml双蒸水清洗4-6遍，4000rpm离心10min；
（4）将步骤（3）所得沉淀用绞肉机绞碎；
组织样酶解：
（a）将步骤（4）中所得的绞碎后的沉淀加入500ml配置好的木瓜蛋白酶 PBS溶液中，50-55℃下摇匀12h，然后10000rpm离心10min；所述木瓜蛋白酶PBS溶液为5mg/ml的木瓜蛋白酶PBS溶液，pH为7.2-7.4，现用现配；
（b）将步骤（a）所得沉淀溶于100ml PBS溶液中，加入蛋白酶K溶液2ml，37℃摇匀8h，然后90℃处理30min，降温后，10000rpm离心10min；所述PBS溶液pH为7.2-7.4；所述蛋白酶K溶液为20mg/ml的蛋白酶K溶液，常温保存；
（c）将步骤（b）所得沉淀悬浮于100ml 2% TritonX-100的PBS溶液中，室温下摇匀30min，10000rpm离心10min；所述2% TritonX-100的PBS溶液的pH为7.2-7.4，配置后4℃保存；
（d）将步骤（c）所得沉淀用50ml双蒸水清洗6遍，10000rpm，离心10min；
组织样干燥：
将步骤（d）所得的黑色素沉淀用冷冻干燥机干燥4-6h，称重后存于-20℃冰箱中。
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