[发明专利]用于结合磁珠并偶联转座酶的DNA接头、磁珠及DOT-seq方法

权利要求书

1.一种用于结合磁珠并偶联转座酶的DNA接头，所述接头为U形接头，接头的中间序列为寡聚单链核苷酸，且被修饰，以连接到磁珠上，寡聚单链核苷酸的两端分别带有双链Tn5识别序列， 两端Tn5识别序列后面分别连接illumina测序文库结构的P5序列及P7序列。

2.根据权利要求1所述的DNA接头，其特征在于：U形接头中间的寡聚单链核苷酸被生物素修饰、氨基修饰或者Arcydite修饰。

3.根据权利要求2所述的DNA接头，其特征在于： U形接头中间的寡聚单链核苷酸长度为8-32 nt。

4.根据权利要求1或2所述的DNA接头，其特征在于：所述U形接头的序列为：[Phos]CTGTCTCTTATACACATCTCCGAGC CCACGAGACT…T[Int NH2 C6 dT]T…TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGA CAG，其中U形接头中间的寡聚单链核苷酸长度为8-32nt。

5.根据权利要求1或2所述的DNA接头，其特征在于：所述U形接头的序列为：[Phos]CTGTCTCTTATACACATCTCCGAGC CCACGAGACT…T[Int Biotin dT]T…TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGA CAG，其中U形接头中间的寡聚单链核苷酸长度为8-32nt。

6.一种用于偶联转座酶的磁珠，包括磁珠，以及结合在磁珠上的权利要求1-5中任一项所述的DNA接头。

7.根据权利要求6所述磁珠，其特征在于：所述磁珠为链霉亲和素磁珠、羧基磁珠或者聚丙烯酰胺包被磁珠；当磁珠为链霉亲和素磁珠，DNA接头为生物素修饰；当磁珠为羧基磁珠，DNA接头为氨基修饰；当磁珠为聚丙烯酰胺包被磁珠时，DNA接头为Arcydite修饰。

8.一种DOT-seq方法，其步骤包括：

（1）磁珠与退火的DNA接头偶联，获得偶联接头的磁珠，其中DNA接头为权利要求1-5中任一项所述的DNA接头；

（2）步骤（1）获得偶联接头的磁珠与转座酶Tn5孵育结合，得到转座酶偶联磁珠复合物；

（3）步骤（2）获得的转座酶偶联磁珠复合物与DNA样本结合并片段化；

（4）终止转座酶的片段化反应，进行文库扩增，DNA回收。

9.根据权利要求8所述的DOT-seq方法，其特征在于：当步骤（1）中的磁珠为羧基磁珠，DNA接头为氨基修饰时，步骤（1）中加入激活剂以完成偶联，激活剂为吗啉乙磺酸(MES)、N ,N-二甲基乙酰胺(DMAC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)中的一种或数种。

10.根据权利要求8所述的DOT-seq方法，其特征在于：步骤（3）中还需要加入增强剂，所述增强剂为聚乙二醇、聚蔗糖、聚丙二醇、聚乙烯亚胺中的一种或数种。