[发明专利]一种利用沙门氏菌诱导蝇蛆制备抗菌肽的方法

权利要求书

1.一种利用沙门氏菌诱导蝇蛆制备抗菌肽的方法，特点在于以下关键步骤：

诱导蝇蛆：取重悬的沙门氏菌饲喂蝇蛆，培养得到产生免疫防御的蝇蛆；

蝇蛆抗菌肽粗提取：将诱导的活蝇蛆清洗消毒，加入提取液提取并离心，取上清液经沸水浴和冷却再离心，然后浓缩保存粗提液；

分离纯化：将粗提液依次经凝胶柱G75和凝胶柱G25洗脱收集，得到分离纯化的蝇蛆抗菌肽。

2.根据权利要求1所述的利用沙门氏菌诱导蝇蛆制备抗菌肽的方法，关键在于，所述沙门氏菌的重悬步骤为：将沙门氏菌菌液以12000r/min离心10～15min，弃上清，加入生理盐水，振荡混匀后再12000r/min离心10～15min，重复2～3次，最后将菌体沉淀与生理盐水振荡混匀使用。

3.根据权利要求1所述的利用沙门氏菌诱导蝇蛆制备抗菌肽的方法，其关键在于，所述诱导蝇蛆步骤中的饲喂培养的温度为24～26℃，培养时间为24h。

4.根据权利要求1所述的利用沙门氏菌诱导蝇蛆制备抗菌肽的方法，其关键在于，所述粗提取步骤中的清洗消毒具体为：先将蝇蛆用自来水冲洗5～6次，再用蒸馏水冲洗2～4次，用滤纸将虫体表面的水吸干后用75％的酒精对虫体进行消毒。

5.根据权利要求1所述的利用沙门氏菌诱导蝇蛆制备抗菌肽的方法，其关键在于，所述粗提取步骤中的蝇蛆和提取液的比例为1mg：(2～4)mL。

6.根据权利要求5所述的利用沙门氏菌诱导蝇蛆制备抗菌肽的方法，其关键在于，所述提取液用0.05mol/L，pH＝5.0的乙酸铵缓冲液、0.35μg/mL的PMSF和0.2％的巯基乙醇配制而成。

7.根据权利要求1所述的利用沙门氏菌诱导蝇蛆制备抗菌肽的方法，其关键在于，所述粗提取步骤中，首次离心的次数为3～5次，每次的速率为12000r/min，时间为15～20min，再次离心的速率为12000r/min，离心时间为20～25min。

8.根据权利要求1所述的利用沙门氏菌诱导蝇蛆制备抗菌肽的方法，其关键在于，所述分离纯化步骤中粗提液过凝胶柱G75的步骤具体为：先用双蒸水以1.0mL/min的流速冲洗层析柱，再用流动相为0.05moL/L的乙酸铵溶液以同样的流速平衡1～2h，然后加粗提液，用流动相以1.0mL/min的流速进行洗脱，于280mm波长检测，记录色谱曲线。

9.根据权利要求1～8任一项所述的利用沙门氏菌诱导蝇蛆制备抗菌肽的方法能获得蝇蛆抗菌肽。

10.根据权利要求9所述的利用沙门氏菌诱导蝇蛆制备抗菌肽的方法，获得的蝇蛆抗菌肽作为鸡白痢治疗药物在鸡养殖业中的应用。