[发明专利]一种利用沙门氏菌诱导蝇蛆制备抗菌肽的方法

说明书

本发明提出了一种利用沙门氏菌诱导蝇蛆制备抗菌肽的方法，涉及生物制备技术领域。一种利用沙门氏菌诱导蝇蛆制备抗菌肽的方法，包括以下步骤：取经重悬的沙门氏菌饲喂蝇蛆，培养获得产生免疫防御的活蝇蛆，进行清洗消毒，用提取液提取、离心，取上清液经沸水浴和冷却再离心，并浓缩保存粗提液，将其依次经凝胶柱G75和凝胶柱G25洗脱收集，获得纯化的蝇蛆抗菌肽。本发明用沙门氏菌诱导蝇蛆，刺激产生高表达抗菌肽，对粗提的抗菌肽，用凝胶层析柱分离和纯化，获得具有高抑菌活性的蝇蛆抗菌肽组分，其制备方法简单易操作。

技术领域

本发明涉及生物制备技术领域，具体而言，涉及一种利用沙门氏菌诱导蝇蛆制备抗菌肽的方法、通过上述方法制备的蝇蛆抗菌肽，以及该蝇蛆抗菌肽作为鸡白痢治疗药物在鸡养殖业中的应用。

背景技术

近年来，由于人们滥用抗生素，使得许多致病菌出现耐药性，增加了一些疾病的治疗难度，出现了抗生素无法杀死的超级细菌。抗菌肽不仅在抗菌、抗病毒等方面具有显著的作用，而且不易导致耐药菌株的产生，使其成为新一代抗菌肽药物的理想选择。抗菌肽(Antimicrobial peptides，AMP)也称为肽类抗生素，或天然抗生素，是一类具有广谱抗微生物活性的小分子短肽，广泛存在于细菌、植物、脊椎和无脊椎动物中，是天然免疫的重要效应分子，目前发现的昆虫抗菌肽有170多种。

目前已从昆虫(如天蚕蛹、果蝇和麻蝇)、哺乳动物(如牛、猪甚至人)和环节动物(如蚯蚓)等体内分离到了多种抗菌肽。由于天然抗菌肽在自然界或有机体中含量较低，这给抗菌肽的分离纯化带来一定困难。多数抗菌肽结构复杂，不但难以进行结构鉴定，而且也导致化学合成这些物质时存在技术困难、费用高等问题。因此，从来源广泛、成分复杂的原料中分离纯化抗菌肽成为了研究的重要环节。

发明内容

本发明的目的，在于提供一种利用沙门氏菌诱导蝇蛆制备抗菌肽的方法，此方法简单易操作且成本低。

本发明的另一目的，在于提供通过上述制备方法获得的蝇蛆抗菌肽，具有较高的抑菌活性。

本发明的再一目的，在于提供上述蝇蛆抗菌肽作为治疗鸡白痢的药物进行推广应用。

本发明的技术问题是采用以下技术方案来实现的。

一种利用沙门氏菌诱导蝇蛆制备抗菌肽的方法，包括以下步骤：

诱导蝇蛆：取重悬的沙门氏菌饲喂蝇蛆，培养得到产生免疫防御的蝇蛆；

蝇蛆抗菌肽的粗提取：将活蝇蛆清洗消毒，加入提取液进行提取、离心，取上清液经沸水浴和冷却后再离心，然后浓缩保存粗提液；

分离纯化：将粗提液经凝胶柱G75和凝胶柱G25洗脱收集，获得分离纯化的蝇蛆抗菌肽。

首先，本申请实施例能提供一种利用重悬沙门氏菌诱导蝇蛆制备抗菌肽的方法，并经凝胶柱层析分离纯化获得蝇蛆抗菌肽。

其次，本申请实施例能提供一种利用重悬沙门氏菌诱导蝇蛆制备抗菌肽的方法获得的蝇蛆抗菌肽，使其作为治疗鸡白痢药物在养殖业中的应用。

相对于现有技术，本发明的实施例至少具有以下优点或有益效果：

本发明采用重悬的沙门氏菌对蝇蛆进行诱导，刺激其产生抗菌肽，然后收集蝇蛆并粗提抗菌肽，利用G75和G25凝胶层析柱进行分离和纯化，得到具有高抑菌活性的蝇蛆抗菌肽组分，其制备方法简单有效。

本发明制备获得的蝇蛆抗菌肽对沙门氏菌的抑菌活性高于对其他细菌的抑菌力，对鸡白痢具有非常好的疗效，通过沙门氏菌诱导获得的蝇蛆抗菌肽可以作为治疗或预防药物添加，并用于治疗鸡白痢。

具体实施方式