[发明专利]基于ISSR指纹图谱系统鉴别常见菜用黄麻品种的方法及其应用

说明书

本发明属于作物遗传育种领域，涉及菜用黄麻种质的快速筛选，特别是指基于ISSR指纹图谱系统鉴别常见菜用黄麻品种的方法及其应用。步骤如下：提取待检测的菜用黄麻总DNA；以黄麻总DNA为模板，依次以ISSR引物鉴别组中的1号、2号、3号引物为ISSR引物，进行PCR扩增；分析PCR扩增后的条带，根据常见菜用黄麻品种的ISSR引物鉴别组中的每条引物呈现的条带信息建立DNA指纹图谱，鉴定待测菜用黄麻的品种。本发明中通过ISSR引物UBC814，UBC854，UBC872，UBC874，UBC878扩增的谱带的多态性可将5个菜用黄麻品种完全区分开，并且通过提高退火温度大大提高了DNA扩增条带的特异性和准确性。

技术领域

本发明属于作物遗传育种领域，涉及菜用黄麻种质的快速筛选，特别是指基于ISSR指纹图谱系统鉴别常见菜用黄麻品种的方法及其应用。

背景技术

菜用黄麻为锻树科（Tiliaceae）黄麻属（Corchorus）一年生草本植物，属于黄麻（Corchorusolitorius L.）作物中可食用的品种类。菜用黄麻主要食用嫩茎和幼叶，嫩茎质地爽脆，幼叶软滑清香，风味独特，口感极佳，常食具有补钙、硒、微量元素及健脾胃、润肠通便、降血压、祛疲劳、抗癌等功效（李初英等，2015）。菜用黄麻栽培过程病虫害极少，全生产过程可不打任何农药，是绿色有机生态的保健功能型蔬菜品种。目前菜用黄麻主要依靠形态表型差异进行品种分类，但是大多数形态性状易受环境因素影响，且因形态鉴定工作量大、周期长、成本高、受季节限制，很难满足种质鉴定和良种选育的要求。DNA分子标记技术是一种快速高效的遗传分析方法，具有多态性好、遗传稳定、不受环境条件影响等优点，已开始广泛应用于作物遗传育种研究和品种鉴定。

桂麻菜1号：（桂）登（蔬）2014002，从南宁市西乡塘区心圩镇收集的地方黄麻菜种质资源经筛选、鉴定育成。红茎，叶绿色。桂麻菜2号（桂）登（蔬）2014003，从南宁市武鸣区里建镇收集的地方黄麻菜种质资源，经筛选、鉴定育成。白茎，叶绿色。桂麻菜1号和桂麻菜2号，以高抗氧化活性、天然富硒、高膳食纤维、耐高温多湿为典型特征，是目前最受欢迎的药食两用蔬菜，成为高温多湿的华南地区的主栽品种。桂麻菜1号和桂麻菜2号的食用部位嫩茎叶总多酚含量高达363.5 mg/100g，总黄酮含量高达317 mg/100g，是目前报道叶菜类总多酚、总黄酮含量最高的菠菜的2倍以上；膳食纤维含量高达3.17 g/100g，为大白菜（0.6g/100g）的5.28倍。硒蛋白含量为0.081 mg/kg，硒代氨基酸含量占总硒含量的百分比为88.5%（＞65%），达富硒蔬菜的标准（《富硒农产品》（GH/T 1135-2017））。这两个品种具有耐高温和多湿的特性，广泛适宜在华南地区种植，填补了华南地区7-10月份叶菜类蔬菜淡季的缺口。

桂麻菜3号：皖品鉴登字第1809017，从广东潮汕“潮汕红茎麻菜”变异单株系选育，粉红茎、叶绿色。桂麻菜4号：皖品鉴登字第1809018，从广东潮汕“潮汕红茎麻菜”变异单株系选育，粉红茎、叶浅绿色。桂麻菜5号：皖品鉴登字第1809019，从广东潮汕“潮汕红茎麻菜”变异单株系选育，白色茎、叶绿色。桂麻菜3号、桂麻菜4号和桂麻菜5号，以耐盐为典型特征，为盐碱地区蔬菜种植提供新的选择。桂麻菜3号和桂麻菜4号均表现为中耐NaCl和Na₂SO₄；桂麻菜5号表现高耐NaCl和中耐Na₂SO₄，在盐碱地区的合浦、厦门、新疆等地区得到推广种植，很好的解决了盐碱地区缺乏耐盐特色蔬菜品种的问题。

然而由于这5种常见的采用黄麻品种的生活习性、植物性状、遗传基因均比较相近，单纯靠看外表或单纯靠一个基因去鉴定，并不能实现快速的鉴别。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提出一种基于ISSR指纹图谱系统鉴别常见菜用黄麻品种的方法及其应用，以ISSR引物扩增谱带构建指纹图谱表，并引入带型编号和扩增谱带位点编号信息，可以随品种数目增加和更新换代而不断扩充和更新，是一种开放性的，由一系列若干个指纹图谱表构成的DNA指纹图谱构建方法。该方法使品种鉴定过程中DNA指纹图谱检索更简便快速，适合在农业生产中推广应用。