[发明专利]一种用于蓝圆鰺源成分检测的引物和探针组合、试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及生物工程技术领域，具体公开一种用于蓝圆鰺源成分检测的引物和探针组合、试剂盒及其应用。所述用于蓝圆鰺源成分检测的引物和探针中，上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:2所示，探针的序列如SEQ ID NO:3所示。利用本发明的引物和探针的组合，可实现对蓝圆鰺源成分的准确检测，且上述引物和探针组合的特异性强、灵敏度高，灵敏度可达到14pg/μL，同时，检测的准确度高，能够实现对蓝圆鰺源成分的快速检测，对于防止敏感人群食入蓝圆鰺鱼肉制品后过敏现象的发生具有重要意义，具有较高的实用价值。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种用于蓝圆鰺源成分检测的引物和探针组合、试剂盒及其应用。

背景技术

蓝圆鰺(Decapterus maruadsi)属于脊索动物门(Chordata)、硬骨鱼纲(Osteichthyes)、鲈形目(Perciformes)，鲹科(Carangidae)，圆鲹属(Decapterus)的一种。蓝圆鰺具有高蛋白、低脂肪、矿物质含量丰富等特点，是我国重要的经济鱼类之一，其体内还有含有人体所需的多种氨基酸、维生素以及锰、铁、锌等丰富的微量元素，也是一种优质的动物性蛋白鱼类。蓝圆鰺的主要特点是形体较小，头和内脏所占的比例相对较大，生长速度快，但肉质极易腐烂变质，目前主要以鲜销为主，其加工制品主要集中在加工成咸干品、动物饲料以及休闲食品、调味品，鱼糜制品等。由于其体内含有丰富的游离组氨酸，并存在产组胺的微生物，在适宜条件下极易产生组胺，蓝圆鰺还属于高组胺鱼类。食入高组胺鱼肉后，敏感人群会表现为皮疹、荨麻疹、呕吐、头痛等症状，常被称为“组胺中毒”。因此，建立一种准确定量检测鱼肉制品中蓝圆鰺源性成分的方法，对于防止敏感人群食入蓝圆鰺鱼肉制品后过敏现象的发生具有重要意义。

发明内容

鉴于此，本发明提供一种用于蓝圆鰺源成分检测的引物和探针组合、试剂盒及其应用，特异性好，灵敏度高，能准确快速的检测出鱼肉制品中是否含有蓝圆鰺源性成分。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种用于蓝圆鰺源成分检测的引物和探针组合，包括引物对和探针，所述引物对的序列如下：

上游引物-F：5'-TGGCCTTCCCTCGAATGA-3'(SEQ ID NO:1)；

下游引物-R：5'-CGGCCCCGGCTTCA-3'(SEQ ID NO:2)；

所述探针的序列如下：5'-CTTCTGACTACTCCCTCCGTCCTTCCTGC-3'(SEQ ID NO:3)。

相对于现有技术，本发明提供的用于蓝圆鰺源成分检测的引物和探针组合具有以下优势：

本申请以蓝圆鰺线粒体细胞色素c氧化酶亚基I(cox I)基因序列为基础，特异性设计引物对和探针，能够特异性结合到蓝圆鰺源模板DNA上，准确检测出蓝圆鰺源成分，且与鳕鱼、罗非鱼、鲅鱼、巴沙鱼、金枪鱼、鲤鱼、三文鱼、低眼巨鲶等均无交叉扩增反应，特异性强；且上述引物和探针组合的灵敏度高，对蓝圆鰺源性成分DNA的灵敏度达到14pg/μL，能够实现对蓝圆鰺源成分的快速检测，同时检测的准确度高，用时短，且无需特殊的仪器和专业的操作人员，可实现在非实验室条件下快速检测出蓝圆鰺源成分，对于防止敏感人群食入蓝圆鰺鱼肉制品后过敏现象的发生具有重要意义，具有较高的实用价值。

优选的，所述探针的5'端修饰有荧光素，3'端修饰有荧光猝灭基团。

优选的，所述探针为：5'-FAM-CTTCTGACTACTCCCTCCGTCCTTCCTGC-Eclipse-3'。

本发明还提供了上述用于蓝圆鰺源成分检测的引物和探针组合在非诊断性检测鱼肉制品中蓝圆鰺源成分中的应用。