[发明专利]一种能够在烟草中进行高效基因编辑的载体及其应用有效
| 申请号： | 202110786304.5 | 申请日： | 2021-07-12 |
| 公开（公告）号： | CN113667689B | 公开（公告）日： | 2023-04-11 |
| 发明（设计）人： | 代常波;吕婧;孙玉合;李冰洁;王李先秋 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院烟草研究所(中国烟草总公司青州烟草研究所) |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/84;C12N15/55;C12N15/113 |
| 代理公司： | 北京英创嘉友知识产权代理事务所(普通合伙) 11447 | 代理人： | 耿超 |
| 地址： | 266101 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 能够 烟草 进行 高效 基因 编辑 载体 及其 应用 | ||
1.一种能够在烟草中进行高效基因编辑的载体，其特征在于，所述载体中依次插入有35Spro启动子、gRNA插入区、eu终止子、钙网蛋白启动子元件、spCas9蛋白表达元件、ubp终止子和潮霉素筛选标记，所述钙网蛋白启动子元件的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。
2.根据权利要求1所述的载体，其中，所述35Spro启动子的核苷酸序列为SEQ IDNO.10；所述gRNA插入区的核苷酸序列为SEQ ID NO.11；所述eu终止子的核苷酸序列为SEQID NO.12；所述spCas9蛋白表达元件的核苷酸序列为SEQ ID NO.13；所述ubp终止子的核苷酸序列为SEQ ID NO.14；所述潮霉素筛选标记的核苷酸序列为SEQ ID NO.15。
3.根据权利要求1所述的载体，其中，所述gRNA插入区中插入有至少2段tRNA切割序列；所述tRNA切割序列的核苷酸序列为SEQ ID NO.8；所述spCas9蛋白表达元件中具有NLS元件和PA50元件。
4.根据权利要求1所述的载体，其中，所述载体的核苷酸序列为SEQ ID NO.9。
5.一种在烟草中进行高效基因编辑的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
（1）在权利要求1-4中任意一项所述的载体的gRNA插入区中插入靶向待编辑基因的gRNA编码序列，得到基因编辑载体；
（2）用所述基因编辑载体转化农杆菌，得到转化体；
（3）将所述转化体侵染预培养的烟草叶片，得到侵染后的烟草叶片；
（4）将所述侵染后的烟草叶片在含有潮霉素的培养基中进行培养。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述靶向待编辑基因的gRNA的核苷酸序列为SEQID NO. 4、5、6或7。
7.根据权利要求5所述的方法，其中，所述基因编辑载体的核苷酸序列为SEQ ID NO.9的第9754位-第9769位被替换为SEQ ID NO. 2后得到的序列，或者为SEQ ID NO.9的第9754位-第9769位被替换为SEQ ID NO. 3后得到的序列。
8.钙网蛋白启动子元件，其中，所述钙网蛋白启动子元件的核苷酸序列为SEQ IDNO.1。
9.钙网蛋白启动子元件在构建基因编辑载体中的用途，其中，所述钙网蛋白启动子元件的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国农业科学院烟草研究所(中国烟草总公司青州烟草研究所)，未经中国农业科学院烟草研究所(中国烟草总公司青州烟草研究所)许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202110786304.5/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
