[发明专利]用于扩增或检测人腺病毒DNA的引物组及其应用在审
申请号: | 202110786504.0 | 申请日: | 2021-07-12 |
公开(公告)号: | CN113416798A | 公开(公告)日: | 2021-09-21 |
发明(设计)人: | 张其威;张静;吴建国 | 申请(专利权)人: | 暨南大学 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/6858;C12N15/11;C12R1/93 |
代理公司: | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人: | 张晓博 |
地址: | 510632 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 扩增 检测 病毒 dna 引物 及其 应用 | ||
本发明涉及用于扩增或检测人腺病毒DNA的引物组及其应用。该引物组包括针对Penton基因设计的第一引物对、针对Hexon基因设计的第二引物对和针对Fiber基因设计的第三引物对。这三个引物对能够针对人腺病毒的不同基因进行扩增,并且扩增产物片段短,特异性强,能够对中人腺病毒基因型进行分析,能够广泛用于对人腺病毒进行分型和研究过程中;另外利用该引物组进行扩增,其反应最低检测量达到pg级,灵敏度强。
技术领域
本发明涉及人腺病毒分型技术领域,尤其涉及用于扩增或检测人腺病毒DNA的引物组及其应用。
背景技术
人腺病毒(Human Adenovirus,HAdV)属于哺乳动物腺病毒属,主要感染人类呼吸道、消化道、泌尿生殖道。呼吸道腺病毒感染引起的呼吸系统疾病主要包括:急性呼吸道感染(Acute Respiratory Disease,ARD)。咽炎、支气管炎、肺炎等。
迄今为止,在HAdV病毒的A-G种中已鉴定出超过105个HAdV基因型。B种(HAdV-3、HAdV-7、HAdV-14、HAdV-21和HAdV-55)和E种(HAdV-4)通常与急性呼吸道疾病(acuterespiratory disease,ARD)有关,在儿童和成人呼吸道疾病中占很高比例。C种(HAdV-1、HAdV-2和HAdV-5)通常与轻度呼吸道疾病有关,而物种D的类型则导致眼病和胃肠炎。A、F和G种的细菌与胃肠炎有关。因此,快速而准确地对HAdVs进行流行病学调查和临床诊断是非常重要的。
传统的病毒中和试验可以鉴定腺病毒的血清型,但通过全基因组测序及生物信息学分析发现,HAdVs存在基因组重组现象,自HAdV-52以来鉴定的HAdV致病基因型中,几乎都是重组型。全基因组测序仍然相对昂贵,而且无法用于大规模的分子流行病学研究,也无法在疫情爆发时快速识别病毒病原体。因此,为了克服仅使用六进子采样腺病毒病原体的局限性,急需开发了一种简单、快速、经济、实用的分型方法用于HAdVs的流行病学监测。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种快速扩增或检测人腺病毒DNA的引物或试剂盒。本发明的技术方案如下:
本发明第一方面提供用于扩增或检测人腺病毒DNA的引物组,其特征在于,包括针对Penton基因设计的第一引物对、针对Hexon基因设计的第二引物对和针对Fiber基因设计的第三引物对;所述第一引物对包括:Penton-F如SEQ ID NO.1所示,Penton-R和如SEQ IDNO.2所示;所述第二引物对包括:Hexon-F如SEQ ID NO.3所示,Hexon-R如SEQ ID NO.4所示;所述第三引物对包括:Fiber-F如SEQ ID NO.5所示,Fiber-R如SEQ ID NO.6所示,Fiber-CR如SEQ ID NO.7所示。
上述技术方案中,所述引物组用于对人腺病毒进行分型,所述分型的基因型包括对B、C、D和E型人腺病毒。
本发明第二方面提供包括所述引物组的人腺病毒DNA扩增的反应体系。
上述技术方案中,所述反应体系还包括rTaq DNA聚合酶、Mg2+和dNTPs中的至少一种。
本发明第三方面提供利用所述引物组或者所述反应体系进行扩增或检测人腺病毒DNA分子的方法。
上述技术方案中,分别利用所述第一引物对、所述第二引物对和所述第三引物对进行PCR扩增;
使用所述第一引物对进行扩增反应的条件为:94℃条件下预变性2min,94℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸80s,扩增循环次数为35~40次,72℃延伸10min;
使用所述第二引物对进行扩增反应的条件为:94℃条件下预变性2min,然后94℃变性30s,53℃退火30s,72℃延伸100s,扩增循环次数为35~40次,72℃延伸10min;
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