[发明专利]用于检测胸苷激酶1的试剂盒及其应用

说明书

本申请公开了一种用于检测胸苷激酶1的试剂盒，包括用于特异性识别胸苷激酶1的胸苷激酶1第二抗体，所述胸苷激酶1第二抗体标记有信号放大标记物，所述信号放大标记物包括小分子发光标记物以及偶联于小分子发光标记物的聚合物，所述聚合物和所述胸苷激酶1第二抗体相连接。本申请利用夹心法对胸苷激酶1进行检测，将小分子发光标记物连接于聚合物上，能够大大增加发光标记物的标记量，从而实现对胸苷激酶1检测信号的放大功能，进而提高TK1检测灵敏度，扩大胸苷激酶1的线性检测范围；此外，本申请采用小分子发光标记物标记TK1第二抗体，能够直接发光产生检测信号，直接发光反应时间短，从而大大提高胸苷激酶1的检测速度。

技术领域

本申请涉及生物检测领域，具体涉及一种用于检测胸苷激酶1的试剂盒及其应用。

背景技术

免疫磁微粒分离技术是一项基于抗原-抗体特异性结合所开展的免疫学技术。它主要是靠标记在磁微粒表面的修饰基团，如氨基、羧基、甲苯磺酰基、链霉亲和素等基团，与标记抗体共价或非共价偶联，可用于结合特异性抗原，在全自动免疫化学发光分析仪中，进行对应抗原物质的分离。

胸苷激酶1是一种在细胞质中表达并将脱氧胸苷(dTdR)转化为磷酸胸苷酸的激酶。它是dTdR通过补救途径引入到DNA合成的唯一途径的关键激酶。TK1的表达与细胞周期密切相关，它在细胞周期中的调控确保了DNA复制中3-磷酸胸苷酸的供应。这种方式补充了肿瘤细胞异常增殖时的DNA合成的需要。TK1的水平升降与DNA在细胞周期的S期DNA合成速度密切相关，处于增殖期的肿瘤细胞中TK1的水平在细胞周期的G1和S期交界处开始升高，随着细胞进入G1晚期，TK1酶的水平逐渐急剧上升，直至S和G2期交界处。因此TK1酶被称为S期特殊酶。

在血清中检测胸苷激酶1的含量能够有效的在健康体检中筛选出在未来一段时间内癌前疾病进展为恶性肿瘤的高风险人群，同时也能应用于临床科室，监测恶性肿瘤患者的疗效、预后以及复发风险。然而，现有胸苷激酶1检测技术中，常常存在检测灵敏度和线性范围低的问题，无法有效满足临床分析需求。

发明内容

本申请的目的是提供一种用于检测胸苷激酶1的试剂盒及其应用，以提高检测胸苷激酶1的灵敏度和线性范围。

为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：

本申请的第一方面公开了一种用于检测胸苷激酶1的试剂盒，包括用于特异性识别胸苷激酶1的胸苷激酶1(TK1)第二抗体，胸苷激酶1第二抗体标记有信号放大标记物，信号放大标记物包括小分子发光标记物以及偶联于小分子发光标记物的聚合物，聚合物和胸苷激酶1第二抗体相连接。

需要说明的是，在常规的胸苷激酶1检测中，采用酶促发光法对胸苷激酶1进行检测，使用的标记物是大分子酶，并通过加入底物进行酶促反应获得检测信号，因而存在检测时间长、灵敏度低等问题；本申请利用夹心法对胸苷激酶1进行检测，利用TK1第一抗体将胸苷激酶1从待测样本中提取分离出来，进而利用信号放大标记物标记的TK1第二抗体结合胸苷激酶1，将小分子发光标记物连接于聚合物上，能够大大增加发光标记物的标记量，从而实现对胸苷激酶1检测信号的放大功能，进而提高TK1检测灵敏度，进而扩大胸苷激酶1的线性检测范围；此外，本申请采用小分子发光标记物标记胸苷激酶1第二抗体，能够直接发光产生检测信号，直接发光反应时间短，从而大大提高胸苷激酶1的检测速度。

本申请的一种实现方式中，小分子发光标记物包括吖啶酯和异鲁米诺中的至少一种；

优选的，聚合物包括聚甲基丙烯酸、聚甲基丙烯酸甲酯、聚氨基酸和生物大分子中的至少一种；

优选的，聚氨基酸为聚赖氨酸；

优选的，生物大分子为牛血清白蛋白或血蓝蛋白。