[发明专利]一种靶向mesothelin的嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明公开了一种靶向mesothelin的嵌合抗原受体及其应用，所述嵌合抗原受体包括依次连接的胞外区、跨膜区和胞内结构域；胞外区包括胞外信号肽、抗原识别区和铰链区，抗原识别区为全人源anti‑mesothelin scFv；胞内结构域包括胞内信号结构域和胞内共刺激信号结构域。本发明的嵌合抗原受体T细胞对mesothelin阳性肿瘤细胞有很强的杀伤活性，使用全人源抗体做为scfv，不具有免疫原性，可以重复进行给药，增强CAR‑T细胞的治疗效果。本发明还涉及所述靶向人Mesothelin的嵌合受体及其免疫效应细胞在制备预防或治疗肿瘤药物中的应用。

技术领域

本发明涉及一种嵌合抗原受体，尤其涉及一种靶向mesothelin的嵌合抗原受体及其应用。

背景技术

嵌合抗原受体(CAR)是模拟T细胞受体功能的人工受体，其融合了抗原与抗体或配体与受体的识别和结合特异性以及效应T细胞对被识别的肿瘤细胞的杀伤能力。CAR由CD8a引导肽、抗原识别区(配体或单链抗体或Fab片段)、跨膜区、以及T细胞的一系列信号转导区(CD28，CD3，CD137胞内信号传导结构域)依次连接而成。T细胞经修饰后，表面表达的CAR首先通过抗原识别区与肿瘤细胞表面抗原结合，然后通过其信号转导区将活化信号传递至胞内，靶向地激活T细胞对肿瘤细胞杀伤活性。将表达CAR的DNA序列克隆入慢病毒表达载体，并感染从患者血中分离出的T细胞，使T细胞表面表达相应的CAR，再将此修饰的T细胞再输回患者体内，修饰后的T细胞可以在患者体内靶向性地杀伤表达相关抗原的肿瘤细胞，达到清除肿瘤细胞的效果。

mesothelin是一种肿瘤相关抗原，在大多数的恶性胸膜间皮瘤、胰腺癌、卵巢癌及某些肺癌中有表达，并且正常组织中表达范围窄、表达量低。因而可以作为恶性胸膜间皮瘤、胰腺癌、卵巢癌的免疫治疗靶点。

目前CAR-T技术的应用还局限于白血病、骨髓瘤、淋巴瘤等血液系统肿瘤，在诸如胰腺癌等实体肿瘤中的应用较少。

发明内容

发明目的：本发明的目的提供一种靶向mesothelin的嵌合抗原受体；本发明的另一目的提供一种靶向mesothelin的嵌合抗原受体的应用。

技术方案：本发明第一方面提供一种靶向mesothelin的嵌合抗原受体，包括依次连接的胞外区、跨膜区和胞内结构域；胞外区包括胞外信号肽、抗原识别区和铰链区，抗原识别区为全人源anti-mesothelin scFv；胞内结构域包括胞内信号结构域和胞内共刺激信号结构域。

优选的，所述跨膜区选自CD4、CD8a、CD28、4-1BB跨膜区中的一种；胞内信号结构域选自CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD3ζ结构域中的一种；胞内共刺激信号结构域选自CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD3ζ结构域中的一种。

优选的，全人源anti-mesothelin scFv的重链氨基酸序列如SEQ NO.1所示。

SEQ NO.1：

QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQTPEKGLEWIA YIYNSGTTKFNPSLKGRVTISMDASKNQLSMKLSSVTSADTAVYFCARDQGNS PYPDAFDVWGQGTLVTVSS

全人源anti-mesothelin scFv的轻链氨基酸序列如SEQ NO.2所示。

SEQ NO.2：

QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMI YEVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGSNNYVFG TGTKVTVL

优选的，胞内信号结构域CD3ζ进行突变，突变后的CD3ζ的氨基酸序列如 SEQ NO.3所示。