[发明专利]空间邻近化学发光法检测D-二聚体的试剂盒的应用

权利要求书

1.D-二聚体的检测试剂盒在空间邻近化学发光法检测D-二聚体中的应用，其特征在于，所述D-二聚体的检测试剂盒包括：

酶标记物、发光标记物、辅助剂、触发剂和校准品；

所述酶标记物的原料组分包括过氧化物酶标记的D-Dimer检测抗体，所述发光标记物的原料组分包括9,10-二氢吖啶标记的D-Dimer捕获抗体；

所述酶标记物的原料组分还包括0.05M磷酸盐缓冲液；

所述酶标记物的制备方法包括：称取5mg HRP溶解于1mL蒸馏水中，加入0.2mL新配的0.1M过碘酸钠溶液，室温下避光搅拌20min，将上述溶液装入透析袋中，对1mM pH4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜；加入20μL 0.2M pH9.5碳酸盐缓冲液，然后立即加入1mg抗D-Dimer单克隆抗体室温避光轻轻搅拌2h，加新配的4mg/mL硼氢化钠液，混匀，于4℃放置2h，将上述液装入透析袋中，对0.15M pH 7.4PBS透析，4℃过夜；取出透析物，加适量甘油后置于-20℃冰箱保存；

所述发光标记物的原料组分还包括0.05MTris缓冲液；

所述发光标记物的制备方法包括：将发光底物Acridan用500μL的DMF溶解；吸取溶解的Acridan 41.3μL，加入0.05M硼酸钠缓冲液708.7μL，再加入250μL抗DDimer单克隆抗体，翻转混匀4～5次，室温静置30min；将标记反应管置于摇床上，于2～8℃下混合过夜，取出加入适量甘油后置于-20℃冰箱保存。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述校准品包括不同浓度D-Dimer抗原的校准品和0.1M校准品稀释液；

所述校准品稀释液的制备方法包括：称取磷酸二氢钾14.1g，NaH₂PO₄·2H₂O 3.0g，加超纯水溶解，Proclin-300 0.5～1mL，混匀后，加超纯水定容至1000mL，得到校准品稀释液，2～8℃储存备用；

所述校准品的制备方法：校准品的浓度为0ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、10000ng/mL，用所述校准品稀释液将纯化D-二聚体稀释至相应浓度，2～8℃储存备用。

3.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述D-二聚体的检测试剂盒在空间邻近化学发光法检测D-二聚体的方法，包括步骤：

S1：分别加入25μL标准品、25μL过氧化物酶标记的D-Dimer检测抗体和25μL发光标记物至化学发光反应管；

S2：于37℃恒温箱反应15min；

S3：分别加入5μL辅助剂至化学发光反应管，震荡混匀，静置1～2min；之后分别加入触发剂75μL，震荡混匀，立即检测，读取信号值；

S4：对校准品的浓度和发光值进行logistic四参数拟合，通过样本发光值计算样本浓度。