[发明专利]一种从柑橘药材中提取DNA的方法

权利要求书

1.一种从柑橘药材中提取DNA的方法，其特征在于包括以下步骤：

①取约1g的干燥样品置于研钵中，加入0.40g抗坏血酸和0.40g PVP-40，用液氮迅速研磨至粉末，准确称量30mg样品置于-20℃预冷的2mL离心管中；

②加入1mL预冷的核分离液，混匀后继续涡旋5min充分混匀，10000rpm离心5min，弃上清保留沉淀；

③加入1mL 65℃预热的提取液和5μL RNase A，充分混匀5min，置于54℃恒温水浴12h，10000rpm离心5min，吸取上清液置于2mL离心管中，计算上清量；

④加入等体积的去蛋白液，充分混匀5min，10000rpm离心10min，小心吸取上清液转移到2mL离心管中，计算上清量；

⑤加入等体积的氯仿/异戊醇，氯仿与异戊醇的体积比为24:1，充分混匀5min，10000rpm离心10min，小心吸取上清液转移到2mL离心管中，计算上清量；

⑥加入1mL-20℃预冷的异丙醇，置于-20℃静止30min，将溶液转移到装有硅胶膜的吸附柱中，12000rpm离心1min；

⑦弃废液，将吸附柱放回到离心管中，加入600μL漂洗液，12000rpm离心30s；

⑧将吸附柱放入干净的1.5mL离心管中，在吸附膜的中间悬空加入50μL 50℃预热的洗脱液，盖上管盖室温放置3-5min，12000rpm离心1min，将离心液重新置回吸附柱，室温放置2min，12000rpm离心1min，收集洗脱液，即得DNA提取液，

其中，核分离液：含0.1mol/L Tris-HCL，0.05mol/L EDTA，0.14mol/L NaCl，2％质量体积比PVP-40，2％体积比β-巯基乙醇；

提取液：含0.1mol/L Tris-HCL，0.05mol/L EDTA，1.5mol/L NaCl，1.5％质量体积比CTAB、2％质量体积比PVP-40，2％体积比β-巯基乙醇；

去蛋白液：由Tris-苯酚：氯仿：异戊醇体积比＝25:24:1组成；

漂洗液：76％乙醇，10mM醋酸铵；

洗脱液：10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH＝8.0。