[发明专利]高产L-苏氨酸的基因工程菌及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种提高L-苏氨酸发酵产量的方法，其特征在于，所述方法包括弱化或失活发酵菌种中异柠檬酸脱氢酶基因或者与异柠檬酸脱氢酶的氨基酸序列具有80％以上同源性且表达相同功能蛋白的编码基因；所述发酵菌种为具有苏氨酸生产能力的细菌。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细菌为埃希氏菌属(Escherichia)菌种或棒杆菌属(Corynebacterium)菌种。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述细菌为大肠杆菌(Escherichia coli)或谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)。

4.高产L-苏氨酸的基因工程菌的构建方法，其特征在于，所述方法包括弱化或失活大肠杆菌或谷氨酸棒状杆菌中异柠檬酸脱氢酶基因，并将获得的基因弱化或失活菌株用于L-苏氨酸发酵生产；

大肠杆菌异柠檬酸脱氢酶基因在NCBI上的Gene ID：945702；

谷氨酸棒状杆菌异柠檬酸脱氢酶基因在NCBI上的GeneID：1018663。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述弱化或失活选自异柠檬酸脱氢酶基因的起始密码子弱化、启动子弱化、RBS序列弱化或失活中的至少一种。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，起始密码子弱化是用TTG替换异柠檬酸脱氢酶基因的起始密码子ATG；

启动子弱化是用弱启动子替换异柠檬酸脱氢酶基因的启动子；

RBS序列弱化是用可被苏氨酸调控的RBS序列替换异柠檬酸脱氢酶基因的RBS序列。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述大肠杆菌为菌株MHZ-0215-2；和/或

所述谷氨酸棒状杆菌为菌株SMCT033；菌株SMCT033按照谷棒经典方法构建得到，以谷氨酸棒状杆菌ATCC13032作为出发菌株，通过解除lysC基因反馈抑制并强化其表达，hom、thrB解除反馈抑制并强化其表达，强化thrC基因的表达，失活pck、pyk基因；其中，lysC、hom、thrB、thrC、pck、pyk在NCBI上的参考序列编号分别为1021294、1019166、1019167、1020172、1020806、1020040。

8.根据权利要求4-7任一项所述方法构建得到的高产L-苏氨酸的基因工程菌。

9.权利要求1-3任一项所述方法，或权利要求8所述高产L-苏氨酸的基因工程菌在L-苏氨酸发酵生产中的应用。