[发明专利]一种检测沙门氏菌的试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种检测沙门氏菌的试纸条，其特征在于，包括：

底板、样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；

顺着待测样品的层析方向，所述样品垫、所述胶体金垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水垫依次部分重叠连接，所述样品垫、所述胶体金垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水垫设置在所述底板的表面；

所述胶体金垫喷涂有胶体金标记的沙门氏菌多克隆抗体；

所述硝酸纤维素膜上设有包被了灭活的沙门氏菌抗原的检测线，以及包被了鼠抗兔二抗或羊抗兔二抗的质控线；所述检测线靠近所述胶体金垫，所述质控线靠近所述吸水垫。

2.根据权利要求1所述的检测沙门氏菌的试纸条，其特征在于，所述沙门氏菌多克隆抗体的制备方法包括：将灭活的沙门氏菌与弗氏完全佐剂混合制成疫苗，将所述疫苗间隔免疫实验兔，采集所述实验兔的血清并从所述血清中提取和纯化沙门氏菌多克隆抗体，制得所述沙门氏菌多克隆抗体。

3.根据权利要求2所述的检测沙门氏菌的试纸条，其特征在于，所述胶体金标记的沙门氏菌多克隆抗体的制备方法包括：将胶体金、所述沙门氏菌多克隆抗体、复溶液和碳酸钾混合反应，然后加入BSA封闭液，最后离心去除上清，得到的沉淀与所述复溶液混合，制得胶体金标记的沙门氏菌多克隆抗体；

其中，每1mL胶体金加入10～40μL2mg/mL所述沙门氏菌多克隆抗体、20μL所述复溶液以及2μL 0.2M所述碳酸钾；

所述复溶液包括蔗糖、海藻糖、PEG2000、牛血清白蛋白、吐温-20和PBS；所述蔗糖的终浓度为5％，所述海藻糖的终浓度为2％，所述PEG2000的终浓度为1％，所述牛血清白蛋白的终浓度为1％，所述吐温-20的终浓度为0.25％，所述PBS的终浓度为0.01mol/mL。

4.根据权利要求3所述的检测沙门氏菌的试纸条，其特征在于，所述胶体金的制备方法包括：将质量百分比为0.01％的氯金酸溶液加热至沸腾，然后加入质量百分比为1％的柠檬酸三钠反应，制得胶体金。

5.根据权利要求1所述的检测沙门氏菌的试纸条，其特征在于，所述胶体金标记的沙门氏菌多克隆抗体的喷涂量为8μL/cm。

6.根据权利要求1所述的检测沙门氏菌的试纸条，其特征在于，所述检测线的制备方法包括：将10⁸CFU/mL的灭活的沙门氏菌喷涂于所述硝酸纤维素膜上形成所述检测线；所述灭活的沙门氏菌的喷涂量为1μL/cm。

7.根据权利要求1所述的检测沙门氏菌的试纸条，其特征在于，所述质控线的制备方法包括：将终浓度为1mg/mL的鼠抗兔二抗，或将终浓度为1mg/mL的羊抗兔二抗喷涂于所述硝酸纤维素膜上形成所述质控线；所述鼠抗兔二抗或所述羊抗兔二抗的喷涂量为1μL/cm。

8.根据权利要求2或6所述的检测沙门氏菌的试纸条，其特征在于，所述灭活的沙门氏菌的制备方法包括：将沙门氏菌菌种复苏并接种于液体培养基中进行扩增培养，将扩增后的所述沙门氏菌采用PBS离心洗涤，去除所述液体培养基，得到沙门氏菌沉淀；最后将所述沙门氏菌沉淀用PBS重悬并添加1％的甲醛溶液灭活培养，采用PBS将所述沙门氏菌菌液离心清洗，去除所述甲醛溶液，得到的沙门氏菌菌液涂布在营养琼脂平板，无菌落长出得到灭活的沙门氏菌。

9.根据权利要求1所述的检测沙门氏菌的试纸条，其特征在于，所述检测线与所述质控线相互平行，两者相距3～6mm。

10.权利要求1～9任意一项所述的检测沙门氏菌的试纸条的制备方法，其特征在于，包括：

步骤1、将胶体金标记的沙门氏菌多克隆抗体喷涂在胶体金垫上；

将灭活的沙门氏菌喷涂于硝酸纤维素膜上形成检测线，将鼠抗兔二抗或羊抗兔二抗喷涂于所述硝酸纤维素膜上形成质控线；所述检测线靠近所述胶体金垫，所述质控线靠近吸水垫；

步骤2、以待测样品的层析方向，将样品垫、所述胶体金垫、所述硝酸纤维素膜和吸水垫依次重叠预置面积相互连接，所述样品垫、所述胶体金垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水垫固定在底板的表面。