[发明专利]链霉菌HL-66、其发酵产物、菌剂及用途

说明书

本发明涉及微生物及植物免疫诱抗剂技术领域，具体涉及链霉菌HL‑66、其发酵产物、菌剂及用途。本发明的链霉菌HL‑66于2021年6月08日保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.22674，本发明的链霉菌HL‑66能够代谢链霉多聚糖A，其具有广谱的抗病毒和抑菌活性，且能够激发植物自身对多种真菌及病毒病害的抗病性，在防治农业病害方面具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及微生物及植物免疫诱抗剂技术领域，具体涉及链霉菌HL-66、其发酵产物、菌剂及用途。

背景技术

诱导植物免疫抗性是近年来兴起的一种绿色植物保护防控手段。该方法的根本在于利用植物自身分子免疫系统，达到病害的防控目标，这是一种不同于传统农药防治的、对生态和环境友好的植物保护方法。诱导子作为植物诱导抗性的主要因子，具有增强植物广谱抗病能力，同时还具有提高植物抗逆和促进植物生长的功能。利用诱导子诱导植物免疫抗性进行生物防治，可从源头上减少化学农药的使用量，尤其符合当今食品安全和农业可持续发展的要求。

然而，目前的植物免疫诱抗剂对不同植物具有选择性，适用范围较小。

发明内容

本发明旨在解决现有技术中存在的技术问题，为此，本发明的目的之一，提供一株链霉菌HL-66，该菌株保藏编号为：CGMCC No.22674。

本发明的目的之二，提供所述链霉菌HL-66的发酵产物，所述发酵产物为链霉多聚糖A，制备方法包括以下步骤：

S1、将所述链霉菌HL-66的孢子接种于种子培养基，25-26℃培养3-5天，既得菌种；将菌种按接种量3％-9％接种于发酵培养基中发酵，28-30℃下培养5-6天，收集发酵液；

S2、发酵液经固液分离获得上清液，上清液浓缩冻干，将冻干物加入水溶解，沸水提取3-5小时，过滤除杂，浓缩，加入4-20倍体积的无水乙醇，搅拌、沉淀过夜、抽滤，得到沉淀物；

S3、将沉淀物重新用水溶解，加入Sevag试剂，震荡、静置、离心、除蛋白，流水透析得粗多糖；

S4、使用DEAE Sepharose Fast Flow对粗多糖进行极性分离，调整流速为5mL/min，蒸馏水平衡2h；上清液上样，通过全自动凝胶纯化系统进行纯化，结合示差检测器在线检测收集160-190min组分，得到链霉多聚糖A。

更进一步的，每升的种子培养基中含有：酵母提取物3-5g，葡萄糖3-5g，K₂HPO₄ 3-5g，KH₂PO₄ 0.4-0.6g，NaCl 0.9-1.1g，微量盐溶液1-1.2mL，pH7.5。

更进一步的，每升的发酵培养基中含有：葡萄糖20-22g，微量盐溶液5-6mL，pH7.2-7.6。

更进一步的，每升的微量盐溶液中含有：CuCl₂ 0.0004-0.0005g，FeSO₄ 0.0004-0.0005g，ZnCl₂ 0.0004-0.0005g，MnCl₂·4H₂O 0.0004-0.0005g，CaCl₂ 0.0004-0.0005g。

本发明的目的之三，提供以所述链霉菌HL-66的发酵产物为有效成分的菌剂。

本发明的目的之四，提供所述菌剂在制备提高植物自身抗病性的产品中的用途。

进一步的，真菌病害包括：番茄灰霉病、黄瓜枯萎病、马铃薯晚疫病、油菜菌核病、苹果腐烂病、烟草赤星病和烟草黑胫病；病毒病害包括：烟草花叶病毒病、黄瓜花叶病毒病、番茄黄化曲叶病毒病和小麦黄矮病毒病。