[发明专利]双模态检测CRP的试纸条、制备方法及检测方法

权利要求书

1.一种双模态检测CRP的试纸条的制备方法，其特征在于，该方法包括：

步骤1：将CRP单克隆抗体I和羊抗兔二抗IgG分别与抗体稀释液混合，包被于硝酸纤维素膜上，分别作为检测线和质控线；

步骤2：沿层析方向依次将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫粘贴在底板上，制备初级试纸条；

步骤3：制备CRP单克隆抗体II修饰的金纳米棒偶联物，将其加于所述初级试纸条的结合垫上，得到双模态检测CRP的试纸条。

2.根据权利要求1所述的一种双模态检测CRP的试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤1中，所述CRP单克隆抗体I和羊抗兔二抗IgG的浓度均为0.5～2mg mL^-1。

3.根据权利要求1所述的一种双模态检测CRP的试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤1中，所述抗体的包被具体过程为：使用三维划膜仪将CRP单克隆抗体I和羊抗兔二抗IgG喷涂于所述硝酸纤维素膜上，划线量为1μg mL^-1，然后置于37℃真空烘箱中过夜，烘干。

4.根据权利要求1所述的一种双模态检测CRP的试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤1中，所述抗体稀释液的组成为0.01mol mL^-1的磷酸盐缓冲溶液。

5.根据权利要求1所述的一种双模态检测CRP的试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤2中样品垫预先浸泡于0.02mol mL^-1Tris-HCl溶液中，置于37℃真空烘箱中4h，烘干；所述的Tris-HCl溶液pH＝8.0，含0.1％吐温20，0.5％PVP。

6.根据权利要求1所述的一种双模态检测CRP的试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤3中，所述CRP单克隆抗体II修饰的金纳米棒偶联物的用量为2～6μL。

7.根据权利要求1所述的一种双模态检测CRP的试纸条的制备方法，其特征在于，所述CRP单克隆抗体II修饰的金纳米棒偶联物的具体制备步骤为：

采用种子生长法合成金纳米棒，取1mL所述的金纳米棒溶液与100μL 1％的聚丙烯酸钠盐混合搅拌，8000rpm离心后分散于1mL 10mmol L^-1的2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液中，加入10μL 100mmol L^-1的1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和10μL 100mmol L^-1的N-羟基琥珀酰亚胺，反应30min后，加入10μg的CRP单克隆抗体Ⅱ，继续反应2h后，加入10μL10mg mL^-1的BSA封闭30min，离心得到抗体Ⅱ修饰的金纳米棒偶联物；将其分散于0.02molmL^-1 Tris-HCl溶液中，所述的Tris-HCl溶液pH＝8.0，含1％BSA，20％蔗糖和5％海藻糖。

8.根据权利要求1所述的一种双模态检测CRP的试纸条的制备方法，其特征在于，所述金纳米棒的合成步骤为：

1)制备种子溶液：将0℃的0.6mL 0.01mol L^-1NaBH₄溶液加入到包含5mL 0.2mol L^-1CTAB和5mL 0.5mmol L^-1HAuCl₄的混合溶液中，室温下快速搅拌2min后，静置2h得到种子溶液；

2)合成金纳米棒：将50mL 0.2mol L^-1CTAB溶液，50mL 1mmol L^-1HAuCl₄溶液，3mL 4mmolL^-1AgNO₃溶液在室温下混合均匀后，加入0.7mL 0.1mol L^-1的抗坏血酸。混合均匀后，加入0.24mL所述种子溶液，27～30℃恒温静置反应24h后，10000rpm离心洗涤3次，分散于去离子水中，得到金纳米棒溶液。