[发明专利]双模态检测CRP的试纸条、制备方法及检测方法

说明书

本发明提供一种双模态检测CRP的试纸条、制备方法及检测方法，属于生物技术领域。该方法在硝酸纤维素膜上包被CRP单克隆抗体I和羊抗兔IgG分别作为检测线和质控线，以金纳米棒标记CRP单克隆抗体II，采用免疫层析技术和双抗体夹心法制备用于CRP双模态检测的免疫层析试纸条。检测样品时，抗原与抗体结合，产生肉眼可见的检测线。由于金纳米棒具有独特的光学和光热性质，可以通过扫描灰度和光热成像获取检测的灰度和光热信号，实现对CRP的定量。本方法具有成本低，简单快速，样品消耗量少，无需专业人员的优点。利用该方法能检测到CRP的最低浓度为1ng/mL，标准曲线范围为50‑2000ng/mL。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种双模态检测CRP的试纸条、制备方法及检测方法。

背景技术

CRP是一种众所周知的急性期生物标志物，它常被用于诊断炎性、感染性疾病及心血管疾病等。通常，血液中CRP浓度不高于5μg mL^-1，在炎症及细菌感染时，其含量迅速升高至大于50μg mL^-1；但当浓度大于3μg mL^-1时提示心血管疾病的危险性增加。因此，检测血液中CRP水平对临床疾病和疗效诊断具有很高的价值。目前，常规的CRP检查主要利用酶联免疫法，化学发光法和免疫比浊法。但这些方法需要昂贵的仪器，操作过程复杂，耗时且需要专业人员，不适用于即时检验。

胶体金免疫层析技术具有检测速度快，操作简便，成本低的优点，已被广泛用于食品，环境和临床诊断领域的即时检测。但常用的金纳米粒子通常获取比色信号实现定性或半定量分析。与之相比，金纳米棒具有较强的表面等离子体效应，和较高的光热转换效率，可使其同时被用作比色和光热探针，实现高灵敏的定量分析。但目前，使用基于金纳米棒的免疫层析技术用于CRP定量分析的研究还存在空缺。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有检测CRP方法价格昂贵、操作复杂、耗时长及难以实现定量的缺点，而提供一种双模态检测CRP的试纸条、制备方法及检测方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明首先提供一种双模态检测CRP的试纸条的制备方法，该方法包括：

步骤1：将CRP单克隆抗体I和羊抗兔二抗IgG分别与抗体稀释液混合，包被于硝酸纤维素膜上，分别作为检测线和质控线；

步骤2：沿层析方向依次将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫粘贴在底板上，制备初级试纸条；

步骤3：制备CRP单克隆抗体II修饰的金纳米棒偶联物，将其加于所述初级试纸条的结合垫上，得到双模态检测CRP的试纸条。

进一步的，所述步骤1中，所述CRP单克隆抗体I和羊抗兔二抗IgG的浓度均为0.5～2mg mL^-1。

进一步的，所述步骤1中，所述抗体的包被具体过程为：使用三维划膜仪将CRP单克隆抗体I和羊抗兔二抗IgG喷涂于所述硝酸纤维素膜上，划线量为1μg mL^-1，然后置于37℃真空烘箱中过夜，烘干。

进一步的，所述步骤1中，所述抗体稀释液的组成为0.01mol mL^-1的磷酸盐缓冲溶液。

进一步的，所述步骤2中样品垫预先浸泡于0.02mol mL^-1Tris-HCl溶液中(pH＝8.0，含0.1％吐温20，0.5％PVP)，置于37℃真空烘箱中4h，烘干。

进一步的，所述步骤3中，所述CRP单克隆抗体II修饰的金纳米棒偶联物的用量为2～6μL。

进一步的，所述CRP单克隆抗体II修饰的金纳米棒偶联物的具体制备步骤为：