[发明专利]一种A型塞内卡病毒基因工程复合表位蛋白、疫苗及其应用

说明书

本发明提供了一种A型塞内卡病毒基因工程复合表位蛋白、疫苗及其应用，属于兽医生物制品技术领域。本发明提供了A型塞内卡病毒基因工程复合表位蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示。经体外重组表达得到重组复合表位蛋白后，与佐剂混合制备的疫苗免疫健康易感仔猪，28天时可检测到特异性抗体和中和抗体的产生，且本申请保护的复合表位蛋白rP2攻毒保护率为80％以上，与对照复合表位蛋白相比具有较高的攻毒保护作用。制备的新型A型塞内卡病毒基因工程复合表位蛋白疫苗，在防控A型塞内卡病毒方面具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于兽医生物制品技术领域，具体涉及一种A型塞内卡病毒基因工程复合表位蛋白、疫苗及其应用。

背景技术

塞内卡病毒病是由A型塞内卡病毒(Seneca virus A，SVA)引起的一种主要感染猪的病毒性传染病。临床症状与口蹄疫、猪水泡病和水泡性口炎极为相似，以猪鼻吻部、口腔粘膜和蹄冠等部位发生水疱、溃烂甚至蹄壳脱落为特征，偶见腹泻症状，病情急促，新生仔猪(4日龄以内)发病以后死亡率高达30％～70％。该病对养猪业的生产和经济效益具有很大地潜在威胁，因此应重视该病的防控。2018年6月20日，农业农村部发布了《关于做好塞内卡病毒病防治工作的通知》，引起了业界对塞内卡病毒病的关注。

A型塞内卡病毒在分类上属于小RNA病毒科，塞内卡病毒属，A型塞内卡病毒是其唯一成员。SVA具有典型的小RNA病毒结构特点。结构蛋白VP1和VP2上存在着许多不规则的环状结构，这些结构与病毒吸附、入侵、保护性免疫应答和血清型特异性有关。研究显示，SVA可以诱导机体产生B细胞和T细胞免疫应答，而VP1蛋白含有多个中和结构域，是最重要的免疫原性蛋白。

疫苗接种是特异性预防和控制各类疫病的可靠和有效手段，但目前，只有少数研究评价了宿主对SVA感染的免疫应答，对于SVA疫苗的研究更是处于探索阶段，只有个别研究者如yang等进行了SVA灭活疫苗的初步研究，尚无商品化疫苗问世，也无特效的治疗方法。而表位疫苗作为一种更加安全可靠、便于规模化生产的新型疫苗，在口蹄疫、疟疾和肝炎等疫病的防治过程中有着广泛而成功的应用。目前关于SVA表位疫苗的研究尚未见文献报道，研究和开发安全高效的SVA表位疫苗具有重要的科学和应用价值。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种A型塞内卡病毒基因工程复合表位蛋白、疫苗及其应用，所述复合表位蛋白能够产生良好的免疫保护效果，为制备一种安全、高效的塞内卡病毒病新型基因工程疫苗提供了基础。

本发明提供了一种A型塞内卡病毒基因工程复合表位蛋白，包括B细胞表位和T细胞表位；

所述B细胞表位包括A型塞内卡病毒的VP1蛋白、VP2蛋白和VP3蛋白；所述VP1蛋白包括氨基酸序列依次如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：4所示的片段1～片段4；

所述VP2蛋白包括氨基酸序列依次如SEQ ID NO：5～SEQ ID NO：9所示的片段5～片段9；

所述VP3蛋白包括氨基酸序列依次如SEQ ID NO：10所示的片段10；

所述T细胞表位包括PADRE和invasin；

所述PADRE的氨基酸序列如SEQ ID NO：11所示；

所述invasin的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示。

优选的，复合表位蛋白为PADRE-片段5-片段6-片段7-片段8-片段9-片段10-片段1-片段2-片段3-片段4-invasin。

优选的，所述复合表位蛋白还包括连接肽；

所述B细胞表位之间用连接肽GGSSGG连接；所述B细胞表位与T细胞表位之间用连接肽GGC连接。

优选的，所述复合表位蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示。