[发明专利]肺炎支原体IgM抗体胶体金免疫层析检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及免疫层析领域，具体而言，提供了一种肺炎支原体IgM抗体胶体金免疫层析检测试剂盒及其制备方法。本发明的肺炎支原体IgM抗体胶体金免疫层析检测试剂盒，其包括检测试纸条和待检测样本稀释液，其中，检测试纸条包括底板和依次设置于底板上的样品垫、结合垫、检测垫和吸水垫，该试剂盒利用免疫层析原理对待测样本进行检测，成本低、耗时短，同时采用包括10‑100mM Tris‑HCl，0.1‑0.5(w/v)％S9，0.1‑0.5(w/v)％S17和10‑100mM NaCl的稀释液对待测样本进行稀释，可以显著提高检测的灵敏度和特异性，从而改善肺炎支原体的检测准确性。

技术领域

本发明涉及免疫层析领域，具体而言，涉及一种肺炎支原体IgM抗体胶体金免疫层析检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae，MP)是一种无细胞壁的原核细胞微生物，属于柔膜体纲，是引起社区获得性肺炎的主要病原体。

目前肺炎支原体诊断的方法有：分离培养、胶体金法、被动凝集法、酶联免疫吸附法、补体结合实验、荧光定量PCR等。其中，分离培养的病原体培养周期较长；被动凝集法和补体结合试验无法区分IgM和IgG；酶联免疫法和荧光定量PCR虽然具有灵敏度高，特异性强等优点，但也有着操作复杂、对实验室条件和操作人员的技术要求较高等缺点，限制了其在临床上的应用。胶体金法可以便捷的进行检测，成本低，同时，检测结果直观、肉眼可见，不需要特殊仪器设备。然而，现有技术中的肺炎支原体胶体金检测技术依然存在批间差大，灵敏度低，金标物质不稳定的问题。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种肺炎支原体IgM抗体胶体金免疫层析检测试剂盒。

本发明的第二目的在于提供上述检测试剂盒的制备方法。

一种肺炎支原体IgM抗体胶体金免疫层析检测试剂盒，包括检测试纸条和待测样本稀释液；

所述检测试纸条包括底板和依次设置于底板上的样品垫、结合垫、检测垫和吸水垫；

所述待测样本稀释液包括：10-100mM Tris-HCl，0.1-0.5(w/v)％S9，0.1-0.5(w/v)％S17和10-100mM NaCl。

进一步地，所述样品垫的处理液包括：10-100mM Tris-HCl，0.2-3(w/v)％BSA，0.1-2(w/v)％酪蛋白，100-200μg/mL鼠抗人RBC抗体，10-100mg/mL植物凝集素和0.05-0.5(w/v)％吐温-20。

进一步地，结合垫包被有胶体金标记的鼠抗人IgM单克隆抗体，胶体金的粒径为25-35nm；

优选地，胶体金标记的鼠抗人IgM单克隆抗体的稀释液包括：10-100mM Tris-HCl，3-10(w/v)％蔗糖，1-5(w/v)％海藻糖，0.5-3(w/v)％BSA，0.05-0.5(w/v)％PVP40，0.5-3.0(w/v)％酪蛋白和0.1-1.0(w/v)％吐温-20。

进一步地，检测垫包被有平行设置的检测线和质控线，检测线包被有包被浓度为1-1.3mg/mL肺炎支原体抗原，质控线包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体；

优选地，肺炎支原体抗原的稀释液包括：10-20mM PBS，1-5(w/v)％海藻糖，0.2-1.0mM EDTA二钠，0.1-0.5(w/v)％Triton X-100和0.05-0.2(w/v)％BSA；

优选地，羊抗鼠IgG多克隆抗体的稀释液包括：10-20mM PBS，1-5(w/v)％海藻糖和0.2-1.0mM EDTA二钠。

进一步地，样本垫与结合垫交错重叠1-1.5mm；