[发明专利]一种重组角蛋白生产方法

说明书

本发明公开了一种重组角蛋白生产方法，包括如下步骤，重组角蛋白发酵准备，空罐灭菌，实罐灭菌，重组角蛋白接种，重组角蛋白发酵，取样检测，破菌，纯化，精纯化，Q柱纯化以及洗脱等工艺步骤。本发明为重组角蛋白的发酵和纯化分离提供了一种可行的大规模生产方法，整个生产过程能够保证重组角蛋白氨基酸结构的完整性，并且重组角蛋白的分离纯度较高，使得重组角蛋白不仅能够应用到药品、医疗器械、化妆品等更多的领域和能够发挥更好的功效。

技术领域

本发明涉及角蛋白生产技术领域，尤其是涉及一种重组角蛋白生产方法。

背景技术

角蛋白是纤维结构蛋白家族之一，它是构成头发、角、爪和人体皮肤外层的主要蛋白质，角蛋白可保护上皮组织细胞免受损伤或者压力，随着科技的发展，由于角蛋白具有高抗性的理化性质和特殊的生物学作用，在维持表皮正常的生理功能中起着重要的作用，因此，角蛋白常用于饲料和食品工业、制药、肥料、农药、化妆品等各个领域，应用范围十分广泛。

以前角蛋白都是通过采用强酸或者强碱将人体毛发、羊毛或者羽绒等进行水解后提取，但是该步骤会导致角蛋白中一些有益的氨基酸在水解的过程中被完全破坏。另外一方面是角蛋白的分离难度大，使得能够得到的角蛋白量少，严重限制了角蛋白在各个领域中的应用。随着科技的发展，现在已经研究出了重组角蛋白，但是重组角蛋白的工业生产是亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术中的上述问题，本发明提出了一种重组角蛋白生产方法，解决了现在的重组角蛋白如何实现工业生产等技术问题。

本发明的技术方案为：一种重组角蛋白生产方法，包括如下步骤：

S1、发酵准备：配置需要用灭菌锅灭菌的种子培养液，灭菌锅灭菌，配置发酵罐盐培养基1，清洗发酵罐；

S2、空罐灭菌：灭菌前关闭发酵罐所有阀门，打开蒸汽发生器，15～25min后，在控制面板点击灭菌操作，进行多阶段灭菌；

S3、实罐灭菌：取出灭菌锅灭菌的溶液，混合补料，排水，加入发酵罐盐培养基1后进行灭菌；

S4、接种，将重组角蛋白种子液接种在冷却至室温的种子液培养基中；

S5、发酵：发酵罐准备，打开发酵罐的搅拌开关，将发酵罐的转速、温度、流速由手动设置为自动；在发酵罐罐顶阀处点燃酒精棉，再打开罐顶阀，加入接种的种子液培养基，再加入发酵罐盐培养基2，关闭罐顶阀，开始发酵；

S6、取样：调节转速为300～700rpm，加碱调节PH值为7.0～7.5，加补料，诱导，诱导后取样检测，将发酵罐的温度、转速、压力、流速、PH值由自动设置为手动，然后将发酵液进行离心操作，收集沉淀得到菌体在冰箱中保存，发酵结束；

S7、破菌：从冰箱中取出菌体，按照1：20加入25mmol/L磷酸氢二钠十二水溶液，搅拌溶解，用高压匀浆机破菌，将高压匀浆机的压力设置为800～1200Bar，温度设置为4～6℃，破菌5次，离心收集菌体沉淀；

S8、纯化：配置平衡缓冲液，配制8mol/L的尿素，按25Mm/L的量加入PB溶液，溶解过滤，PH值调至7.8，用1mol/L尿素溶液洗涤菌体沉淀，离心收集菌体沉淀，用8mol/L尿素溶液溶解菌体沉淀，加入适量的PB溶液，用磁力搅拌器搅拌，然后离心后取上清液，用平衡缓冲液稀释后过滤，调节其PH值为7.8，作为上样样品；

打开紫外检测仪和蠕动泵，将蠕动泵的数值调到8.0用纯水将1L层析柱填料中的20％酒精冲洗干净，纯水冲洗后，用平衡缓冲液冲洗层析柱，使得紫外检测仪数值稳定，将紫外检测仪的光量值调到零；

将上样样品注入到层析柱内，然后用平衡缓冲液冲洗层析柱后，用洗脱液1和洗脱液2依次进行洗脱，同时分别收集样品；