[发明专利]一种可食用鱼精DNA的提取方法

权利要求书

1.一种可食用鱼精DNA的提取方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

（1）使用缓冲溶液清洗鱼精原料；

（2）将经过（1）处理后的鱼精原料投入缓冲溶液中匀浆、离心，得到接近肤色的沉淀；

（3）用浓盐溶液溶解（2）中获得的沉淀物形成溶液；

（4）用碱性溶液调节（3）中溶液pH至9-11，然后离心得到上清液；

（5）用酸性溶液将（4）中上清液pH调至6-7，获得含DNA的上清液；

（6）用浓度为50~100%乙醇沉淀得到鱼精DNA沉淀；

（7）用无菌去离子水溶解（6）中的鱼精DNA沉淀，并进行纯化，即可。

2.如权利要求1所述的可食用鱼精DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤（1）中所用的缓冲溶液为SSC溶液，具体为0.05-1 M氯化钠和0.01-0.1 M柠檬酸钠浓度比例为14: 5的混合液。

3.如权利要求1所述的可食用鱼精DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤（2）具体过程为：加入2倍原料重量预冷后的SSC溶液，匀浆1.5 min；4℃，4000 rpm离心15 min，弃上清液；将沉淀转移至2倍原料重量预冷后的SSC溶液，匀浆1 min；4℃，4000 rpm离心15 min，弃上清液，重复操作2次。

4.如权利要求1所述的可食用鱼精DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤（3）中的浓盐溶液具体选择为10-20wt%氯化钠溶液；具体操作为加10倍原料重量的10-20wt%氯化钠溶液，搅拌，使鱼精脱氧核糖核蛋白充分溶解，4℃静置48 h。

5.如权利要求1所述的可食用鱼精DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤（4）中碱性溶液为碳酸钠、碳酸氢钠或两者的混合物所配制的；具体为：加入碱性溶液，根据氨基酸组成调整DNP溶液，一般调整范围为pH9-11。

6.如权利要求5所述的可食用鱼精DNA的提取方法，其特征在于，调节DNP溶液pH为9.7；4℃，10000 rpm离心10 min，弃沉淀；加入碱溶液，调节DNP溶液pH为10.8；4℃，10000 rpm离心10 min，弃沉淀。

7.如权利要求1所述的可食用鱼精DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤（5）中酸性溶液为盐酸、醋酸、柠檬酸中的一种或几种混合，调节DNP溶液pH为6.5；4℃，10000 rpm离心10min，弃沉淀。

8.如权利要求1所述的可食用鱼精DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤（6）具体操作包括：加入2倍体积预冷的50-100%乙醇，4℃，10000 rpm离心10 min，弃上清液，重复上述操作2次；用预冷的50-100%洗涤沉淀2次，空干乙醇。

9.如权利要求1所述的可食用鱼精DNA的提取方法，所述步骤（7）中经过截留分子量为5000的超滤膜进行纯化。

10.如权利要求1所述的可食用鱼精DNA的提取方法，所述鱼类选择为海鱼，具体为明太鱼。