[发明专利]一种茯苓多肽及其抗病毒作用

权利要求书

1.一种茯苓多肽，其特征在于，所述多肽序列选自：WQLGLAYVL、MTAANIGVSRII或LALPALALP。

2.一种如权利要求1所述茯苓多肽在制备抗病毒制剂中的应用。

3.一种如权利要求1所述茯苓多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）提取：在研细过筛的茯苓粉中加入Tris-HCl缓冲液，37 ℃水浴60 min，取出冷冻离心，取上清液用盐酸溶液调节至有絮状沉淀，再冷冻离心后弃上清液取沉淀，-70℃预冻24h后，-50℃真空冷冻干燥48 h，得茯苓冻干蛋白；

（2）酶解：取茯苓冻干蛋白溶于HCl溶液中，加入胃蛋白酶于37 ℃水浴酶解12 h，冷冻离心后取上清液以NaOH溶液调节pH至8.0，加入NH4 HCO3缓冲溶液，加入胰蛋白酶于37℃水浴酶解12 h后，沸水浴灭活后冷冻离心，取上清液备用；

（3）净化：MAX SPE柱先后以5mL甲醇、5mL水活化，将上述酶解液上样，依次用3 mL5%氨水、1mL甲醇淋洗，抽干淋洗液，以10mL 5%甲醇溶液洗脱，洗脱液于45℃氮吹干，以1 mL 1%甲酸溶液溶解，过0.22 µm滤膜，进行色谱分离、质谱检测、电喷雾离子源检测；

所述色谱条件为：Hypersil GOLD C18色谱柱，100 m×2.1 mm，1.9 µm；柱温：30℃；流动相：A：0.1%甲酸水，B：乙腈，洗脱梯度：0~50 min，乙腈10% ~ 90%；50~55 min，乙腈90%；55~56 min，乙腈90%~10%；56~60 min，乙腈10%；流速：0.3 mL/min；进样量：10 µL。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述质谱条件为：扫描模式：Full MS/dd-MS2，分析时长60 min，检测方式：正离子，母离子扫描范围：100-1500 m/z，一级质谱分辨率：70000 at m/z，AGG target: le6，一级Maximum IT: 100 ms，Number of scanranges: 1，动态排除: 40.0 s一次，MS2 Activation Type: HCD，Isolation window: 0.4m/z，二级质谱分辨率：17500 at m/z 200，Microscans: 1，二级Maximum IT: 50 ms，碰撞能量: 30 eV，Underfill ratio: 0.1%。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，电喷雾离子源检测方法包括：载气为高纯氮气，纯度99.5%，鞘气流速40个单位arb，辅气流速15个单位arb；喷雾电压3.2 KV；碰撞池采用梯度碰撞能量：25%、35%、55%；毛细管温度320℃，离子透镜电压频率为60，辅气热源温度350℃。