[发明专利]检测血源性感染性病毒的多重荧光定量RT-PCR试剂盒

权利要求书

1.检测血源性感染性病毒的多重荧光定量RT-PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含定量RT-PCR反应液、酶Mix液、引物探针Mix液、标准品、阳性对照品、阴性对照品；其中定量RT-PCR反应液包含有PCR反应缓冲液、酶Mix液，引物探针Mix液包含四组引物和相应的四种不同荧光标记的探针；荧光定量RT-PCR检测用上游引物和下游引物以及相应的特异性探针序列如下：

上游引物CMV-F:5’-CTGGGCATAAGCCATAATCTCATC-3’

下游引物CMV-R:5’-CAGCCTTCCCTAAGACCACC-3’

特异性探针CMV-P:5’-FAM-TGCCGCCATGGCCTGACTGCAGCCA-BHQ1-3’

上游引物EBV-F:5’-CCAAGAAGGTGGCCCAGAT-3’

下游引物EBV-R:5-TCCAGTGCTTGGGCCTTC-3’

特异性探针EBV-P:5’-VIC-TGAGCCTGACGTGCCCCCGGGAGCG-BHQ1-3’

上游引物HSV-F:5’-AGAGGGACATCCAGGACTTTG-3’

下游引物HSV-R：5’-CTTGTAATACACCGTCAGGTGG-3’

特异性探针HSV-P:5’-CY5-ACCGCCGAACTGAGCAGACACCCGC-BHQ3-3’

上游引物RNase P-F:5’-GATTTGGACCTGCGAGCG-3’

下游引物RNase P-R：5’-GAGCGGCTGTCTCCACAAGT-3’

特异性探针RNase P-P:5’-ROX-TTCTGACCTGAAGGCTCTGCGCG-BHQ2-3’

所述标准品包括巨细胞病毒、Epstein-Barr病毒、单纯疱疹病毒及RNase P标准品，其保守区基因序列如下：

巨细胞病毒标准品序列为：

AATCTTAAAGATTTTCTGGGCATAAGACATAATCTCATCAGGAGAGCACTGAGGCAAGTTCTGCAATGCCGCCATGGCCTGACTGCAGCCATTGGTGGTCTTAGGGAAGGCTGAGTTCTTGGTAAAGA

Epstein-Barr病毒标准品序列为：

TTATTTTGAATACCACCAAGAAGGTGGCCCAGATGGTGAGCCTGACGTGCCCCCGGGAGCGATAGAGCAGGGCCCCGCAGATGACCCAGGAGAAGGCCCAAGCACTGGACCCCGGGGTCAGGGT

单纯疱疹病毒标准品序列为：

GCATCACCGACCCGGAGAGGGACATCCAGGACTTTGTCCTCACCGCCGAACTGAGCAGACACCCGCGCGCGTACACCAACAAGCGCCTGGCCCACCTGACGGTGTATTACAAGCTCATGGCCCGCCGC

RNase P标准品序列为：

ATGGCGGTGTTTGCAGATTTGGACCTGCGAGCGGGTTCTGACCTGAAGGCTCTGCGCGGACTTGTGGAGACAGCCGCTCACCTTGGCTATTCAG。

2.根据权利要求1所述的多重荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，阴性对照为高温高压灭菌的焦碳酸二乙酯处理水，阳性对照为巨细胞病毒、Epstein-Barr病毒、单纯疱疹病毒、RNase P的阳性质粒样品。

3.根据权利要求1所述的多重荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，PCR反应缓冲液管含氯化镁和三磷酸脱氧核糖核苷酸混合物，酶Mix液含耐热TaqDNA聚合酶、RNA酶抑制剂和MMLV逆转录酶。

4.根据权利要求1所述的多重荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，引物探针混合液管为棕色管。

5.根据权利要求1所述的多重荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒保存于-20℃。