[发明专利]一种用于提取西红柿中过敏原的提取液及提取方法

说明书

本发明提供一种用于提取西红柿中过敏原的提取液及提取方法。所述提取液包括以下原料组分：pH值为7.0～8.0的PBS缓冲液、0.5～1.5mM的EDTA、3～8mM的L‑半胱氨酸、1X蛋白酶抑制剂、占所述的提取液的总质量的0.05％～0.2％的果胶酶。本发明的提取液能够从西红柿中提取出更多不同分子量的致敏原蛋白，尤其是小分子量的致敏原蛋白，获得的西红柿过敏原提取液透明度高、过敏原以外的杂质含量低，能够直接用于体外检测试剂盒，具有较高的生物学活性及阳性检出率，本底干净。

技术领域

本发明具体涉及一种用于提取西红柿中过敏原的提取液及提取方法。

背景技术

食物过敏是指当食用某种或某些食物时，产生的一种不良反应。常引起皮肤、消化道、呼吸道及心血管系统功能障碍或组织损伤，从而引发一系列的临床症状，严重的食物过敏反应甚至会危及生命和导致死亡。最常见的食入性过敏原为虾、芝麻、西红柿、芒果等。

西红柿体内蛋白质(过敏原)含量极低，加之富含糖类、多酚、果胶、蛋白酶、有机酸、色素及其他大量干扰物质，对过敏原的提取效果及使用性能影响很大，通过现有方法提取的西红柿过敏原无法直接用于体外检测试剂盒等。现有体外检测试剂盒使用的过敏原试剂通常为国外进口过敏原，采购成本高，货期较长，经电泳检测发现外购过敏原的有效条带含量少，并且缺少小分子量的过敏原组分，可能造成漏检。

目前未见针对西红柿过敏原而设计的专用提取液，新鲜水果中过敏原的提取通常采用PBS缓冲液，处理体系规模大，得到的过敏原粗提物浓度极低、含量少，尤其是小分子量的过敏原的提取率更低，用于检测时，检测结果准确度不高；提取液中可溶性固形物很难通过0.22μm滤膜，过滤操作费时费力，过滤后提取液有些许浑浊且无法通过离心等操作去除悬浮物质，透明度稍差，影响使用性能。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够从西红柿中提取出更多不同分子量的致敏原蛋白，尤其是小分子量(6～50kDa)的致敏原蛋白的提取液及提取方法，使用该提取液或提取方法获得的西红柿过敏原提取液透明度高、除过敏原以外的杂质含量低，能够直接用于体外检测试剂盒。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

本发明第一方面提供一种用于提取西红柿中过敏原的提取液，所述提取液包括以下原料组分：pH值为7.0～8.0的PBS缓冲液、0.5～1.5mM的EDTA、3～8mM的L-半胱氨酸、0.5～1.5mM蛋白酶抑制剂、占所述的提取液的总质量的0.05％～0.2％的果胶酶。

优选地，所述提取液包括以下原料组分：pH值为7.2～7.8的PBS缓冲液、0.8～1.2mM的EDTA、4～6mM的L-半胱氨酸、0.8～1.2mM蛋白酶抑制剂、占所述提取液的总质量的0.08％～0.15％的果胶酶。

优选地，所述PBS缓冲液的浓度为0.008～0.02mM，pH值为7.3～7.5。

优选地，所述蛋白酶抑制剂为苯甲基磺酰氟(PMSF)。

可将所述蛋白酶抑制剂配置成100mM浓度保存于-20℃条件下)。

本发明第二方面提供一种西红柿过敏原的提取方法，所述提取方法采用所述的提取液。

优选地，所述提取方法包括以下步骤：

(1)、将西红柿匀浆使用丙酮抽提2～4次，收集果肉残渣；

(2)、将步骤(1)中所得果肉残渣干燥得到西红柿干粉；

(3)、采用权利要求1至3中任一项所述的提取液对步骤(2)中所得西红柿干粉进行过敏原提取，提取结束后收集上清液；

(4)、步骤(3)中所得上清液经过滤、浓缩得到西红柿过敏原。