[发明专利]一种小鼠乳鼠原代心肌细胞分离与培养方法及其应用

权利要求书

1.一种小鼠原代心肌细胞的分离与培养方法，其特征是，包括从乳鼠心脏分离心肌细胞和分离的心肌细胞的培养步骤，具体为：

(1)、采用吸入乙醚麻醉乳鼠，用酒精消毒乳鼠胸壁，剪开胸壁，取出跳动的心脏；

(2)将心脏置于预冷D-hank’s溶液中，剪去左右心耳，用注射器将预冷D-hank’s溶液冲洗心室至流出液澄清，将心室部分置于新的预冷D-hank’s溶液中；

(3)用眼科剪将心脏剪碎至1-3mm³碎块，用预冷D-hank’s溶液清洗心脏碎组织2次再弃去D-hank’s溶液；

(4)将50μL心肌细胞分离酶A溶液加入2.5μL心肌细胞分离酶B溶液中轻轻混匀后加入剪碎的心脏组织中，于CO₂培养箱中37℃培养30min后弃去上清液，用预冷D-hank’s溶液清洗心脏碎组织2次；

(5)加入完全DMEM培养基，吹打混匀心脏组织成单细胞悬液，接种至培养皿中置于CO₂培养箱中差速贴壁30min；

(6)将上述培养皿中的上清液移至离心管中混匀后接种至新的DMEM培养皿中置于CO₂培养箱中差速贴壁30min；

(7)将上述培养皿中的上清液移至离心管中混匀，以2.5×10⁵/cm²接种至DMEM培养皿中进行培养，24h更换培养基，以后隔天更换至细胞接触形成节律性收缩。

2.根据权利要求1所述方法，步骤(5)中，所述DMEM培养基为：DMEM基础培养基、添加10％胎牛血清、添加1％青链霉素。

3.根据权利要求1或2所述方法获得的小鼠原代心肌细胞。

4.根据权利要求3所述小鼠原代心肌细胞的应用。