[发明专利]一种点突变BIRC5抗原表位肽筛选的方法

权利要求书

1.一种筛选点突变BIRC5抗原表位的方法，其特征在于，具体步骤如下：

步骤1)：利用NetMHCpan 4.1和SYFPEITHI在线预测系统对BIRC5抗原9氨基酸残基的CTL表位肽进行全面预测，确定野生肽序列，同时通过点突变技术改变相应氨基酸残基种类筛选突变肽，提高在线预测的评分；

步骤2)：根据步骤1)得到的氨基酸序列，人工合成BIRC5抗原野生表位肽和突变表位肽，同时合成一条阳性肽和一条阴性肽，相应表位肽与T2细胞共孵育后，检测表位肽与HLA-A2分子的实际结合能力；

步骤3)：利用步骤2)筛选获得的突变表位肽与树突细胞在体外建立特异性CTLs克隆，并利用ELISPOT实验和钙黄绿素法，来鉴定CTLs特异性识别杀伤靶细胞的免疫学活性；

所述步骤1)中得到的表位肽具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，得到的突变肽具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；

所述步骤2)中所用的阴性肽具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所用的阳性肽如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中BIRC5抗原表位的生物信息学分析的过程如下：

步骤Ⅰ)利用NetMHCpan 4.1在线预测系统分析BIRC5抗原CTL表位，登录网址http://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHCpan/，在“SUBMISSION”中，“INPUT TYPE”项目选择“Fasta”，输入BIRC5氨基酸全序列，在“PEPTIDE LENGTH”项目选择“9mer peptides”，在“SELECT SPECIES/LOCI”项目中选择“HLA-A*02:01”，点击“Submit”运行远程预测程序；

步骤Ⅱ)利用SYFPEITHI在线预测系统分析BIRC5抗原CTL表位，登录网址http://www.syfpeithi.de/Scripts/MHCServer.dll/EpitopePrediction.htm，在“1.Select MHCtype”项目中选择“HLA-A*02:01”，在“2.Choose a mer”项目中选择“9aa”，然后将BIRC5抗原氨基酸全序列输入待预测序列框中，运行远程预测程序“4.Choose Run to startanalysis”；

步骤Ⅲ)筛选BIRC5野生表位肽，随后对其P2位氨基酸进行点突变改造，再用NetMHCpan4.1和SYFPEITHI两系统对该突变肽进行评分。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤Ⅲ)中BIRC5野生表位肽的筛选原则和点突变改造原则为：

1)筛选原则：

野生表位肽的评分在NetMHCpan 4.1评测中，21％Rank_EL评分30，同时满足在SYFPEITHI评测中，11SYFPEITHI评分20；

候选野生肽的P2位不能为V、L、I、M、T、A六种疏水性氨基酸之一,同时需满足P9位为L、M、I三种疏水性氨基酸之一；

2)点突变改造原则为：

把候选野生肽的P2位改造为V、L、I、M、T、A六种疏水性氨基酸之一，改造后突变肽在NetMHCpan 4.1评测中,％Rank_EL评分2，同时满足在SYFPEITHI评测中，SYFPEITHI评分20。