[发明专利]实时荧光定量PCR检测南方根结线虫的引物、探针及应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及用于实时荧光定量PCR检测南方根结线虫的引物、探针及应用。本发明用于实时荧光定量PCR检测南方根结线虫的引物和探针，正向引物序列Mi‑F2:5'‑CTACCCTTATCGGTGGATCACTA‑3'，反向引物Mi‑R2:5'‑AATGACCCTGAACCAGACGTT‑3'；探针序列Mi‑P2:5'‑AGTTTGACCTCAATGCGGCCATTTGCGT‑3'。本发明的实时荧光定量PCR方法检测南方根结线虫，相比传统的形态学技术便捷、高效，可以实现高特异性、高灵敏度、高通量的快速检测。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及用于实时荧光定量PCR检测南方根结线虫的引物、探针及应用。

背景技术

根结线虫(Meloidogyne spp.)是一类植物根系专性内寄生线虫，其引起的土传病害为仅次于真菌的第二大病害。根结线虫的寄主范围广，可侵染超过3000种植物，涉及蔬菜、水果及粮食作物，我国每年因根结线虫危害造成的损失已超过了人民币50亿元，经济损失严重，制约了我国农业产业的健康发展。因此，在作物播种或移栽前明确田间线虫群体密度，依据不同的群体密度制定相应的防治策略，对降低危害损失具有重要意义。

现有技术采用形态学鉴定方法鉴定根结线虫，该方法借助显微镜进行检视，对检测人员的专业知识背景要求较高，且检测速度慢。

发明内容

本发明的目的在于提供一种实时荧光定量PCR检测南方根结线虫的引物、探针组合物。

本发明的再一目的在于提供上述引物探针组合物的应用。

本发明的再一目的在于提供含有上述组合物的试剂盒。

本发明的再一目的在于提供检测南方根结线虫的方法。

根据本发明具体实施方式的用于实时荧光定量PCR检测南方根结线虫的引物和探针，所述引物和探针的核苷酸序列如下：

正向引物序列Mi-F2:5'-CTACCCTTATCGGTGGATCACTA-3'，

反向引物序列Mi-R2:5'-AATGACCCTGAACCAGACGTT-3'；

探针序列Mi-P2:5'-AGTTTGACCTCAATGCGGCCATTTGCGT-3'。

根据本发明具体实施方式的用于实时荧光定量PCR检测南方根结线虫的引物和探针，所述探针的5’端标记荧光基团，3’端标记淬灭基团，其中，其中，荧光基团可选FAM、HEX、TET等，本发明的优选方案为FAM；淬灭基团可选TAMRA、BHQ等，本发明的优选方案为TAMRA。

本发明的用于实时荧光定量PCR检测南方根结线虫的引物和探针的应用，尤其是在检测南方根结线虫方面。

根据本发明具体实施方式的检测南方根结线虫的试剂盒，所述试剂盒包含本发明的引物和探针，该试剂盒可用于检测南方根结线虫。

根据本发明具体实施方式的实时荧光定量PCR检测南方根结线虫的方法，所述方法包括利用本发明的特异性引物和探针对南方根结线虫的DNA进行PCR扩增的步骤。

其中，所述PCR反应体系包括以下组分：rTaq 0.5μL、MgCl₂ 3μL、10xPCR Buffer2.5μL、dNTPs 2μL、探针1μL、引物2μL(Mi-F2、Mi-R2各1μL)、0.1％BSA 5μL、H₂O 4μL、模板5μL。

所述PCR扩增程序为：95℃30s；94℃5s；60℃30s，45个循环。

本发明的有益效果：