[发明专利]珊瑚共生链霉菌、发酵生产放线菌素D的方法及应用

说明书

本发明公开了一株珊瑚共生链霉菌HNM0560，属于珊瑚共生链霉菌发酵领域，珊瑚共生链霉菌HNM0560的保藏编号CCTCCM2019966。本发明还公开了珊瑚共生链霉菌发酵生产放线菌素D的方法，通过发酵链霉菌HNM0560获得。放线菌素D可用于防治罗非鱼无乳链球菌，防治罗非鱼无乳链球菌的最小抑菌浓度为0.25μg/ml。本发明提供的链霉菌HNM0560在没有经过任何培养基及发酵条件优化的前提下，其放线菌素D的产量可达58mg/l。放线菌素D对罗非鱼无乳链球菌活性具有较强的抑制活性，链霉菌HNM0560具有很好的工业化潜力与应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于菌种，具体涉及珊瑚共生链霉菌、发酵生产放线菌素D的方法及应用

背景技术

珊瑚是热带海洋的第一大无脊椎动物。珊瑚的表面以及内部组织中都含有密集而多样的微生物群落，珊瑚共附生微生物可以产生许多结构多样的化合物，这些化合物具有广泛的生物活性，其中包括针对多种病原体的抗菌化合物，正成为抗菌药物筛选的重要来源。

放线菌素D(Actinomycin D)是19世纪40年代Waksman等人从土壤微小链霉菌(Streptomyces parvullus)中发现并分离的多肽类抗生素。此后，又从链霉菌属的多个种中发现了放线菌素D。例如灰色链霉菌(S.griseus)，弗氏链霉菌(S.fradiae)，抗生链霉菌(S.antibioticus)，金羊毛链霉菌(S.chrysomallus)等。放线菌素D起初研究时表现出抗菌活性。但在研究的进一步发展过程中，放线菌素D展现出优良的抗肿瘤活性，在治疗某些恶性肿瘤的临床医学方面收到良好的成效，因此，当前放线菌素D主要作为抗癌药物被应用。

近年来，放线菌素D的抗菌活性逐渐引起人们的关注，据报道，放线菌素D对一些病原菌如革兰氏阳性细菌具有相当强的抗性，在抗菌药物的研究上也呈现出广阔的应用前景。无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)是一种链球菌属的革兰阳性病原菌，能引起人体、多种陆生和水生生物产生脑膜炎、肺炎和败血症等多种疾病，具有较高的致病和致死率。近年来，无乳链球菌病害在水产领域爆发频繁，其中以罗非鱼无链球菌病害最为严重，对罗非鱼的健康养殖和罗非鱼产业的可持续发展构成严重威胁。因此，研发针对该菌的抗菌药物或益生菌具有重要应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供了一种珊瑚共生链霉菌。

为了实现上述目的，本发明的技术方案为：提供一种珊瑚共生链霉菌，该珊瑚共生链霉菌为链霉菌(Streptomyces sp)HNM0560，于2019年11月22日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，菌种保藏编号CCTCC M 2019966，保藏地址为：湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山。

本发明的另一目的在于提供一种珊瑚共生链霉菌发酵生产放线菌素D的方法，包括以下步骤：

S1、培养HNM0560种子液；

S2、将培养获得的HNM0560的种子液接种至发酵培养基中发酵培养，获得发酵液；

S3、从发酵液中分离放线菌素D。

进一步地，步骤S2中，所述发酵培养基包括可溶性淀粉、酵母浸粉、蛋白胨、自来水、海水，pH 7.0。

进一步地，所述可溶性淀粉8～15g、酵母浸粉2～8g、蛋白胨1～5g、自来水400～600ml、海水400～600ml。

进一步地，步骤S2中，所述发酵条件为26～30℃、150～180rpm、5～7天。

进一步地，所述发酵条件为28℃、180rpm、7天。

进一步地，珊瑚共生链霉菌发酵生产放线菌素D的方法，还包括以下步骤：

S3-1、将所述发酵液过滤，获得菌体；